1994 Fiscal Year Annual Research Report
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06256224
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| Research Institution | Aichi Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
山口 政光 愛知県がんセンター, 研究所・生物学部, 室長 (00182460)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
廣瀬 富美子 愛知県がんセンター, 研究所・生物学部, 研究員 (60208882)
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| Keywords | ショウジョウバエ / マウス / PCNA / DNA複製関連遺伝子 / トランスジェニックフライ / 転写調節エレメント |
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| Research Abstract |
(1)ショウジョウバエPCNA遺伝子発現制御エレメントの個体レベルでの解析:
PCNA遺伝子のプロモーターとその上流域を含む種々の配列をlacZ遺伝子と連結し,P-エレメント法により百数十系統の遺伝子導入ハエを樹立し,lacZ発現の変化を調べることにより,各発生段階での発現に必要な制御配列を明らかにした。成虫の卵巣における発現に必須であるのは転写開始点より上流86bp以内の基本プロ-モーターであり、DRE(PCNAおよびDNApolymeraseα遺伝子のプロモーター上流に存在する、共通の8bpのパリンドローム配列)はそれを増強する。初期胚での発現には、DREが必須となり、また幼虫期での発現には、DRE及びそのさらに上流50bpまでにある第2の調節配列(URE:upstream regulatory element)が必要であることがわかった。最近、このUREに特異的に結合するタンパク因子の検出にも成功している。
(2)マウスPCNAの構造と機能の相関:PCNAは最近種々のサイクリンやp21と相互作用することが明らかにされ、注目を集めている。in vitro 転写・翻訳系により作製したマウスPCNAの各種欠失変異体と、大腸菌で発現させたマウスDタイプ-サイクリンとGSTとの融合蛋白との結合能を調べた。その結果、261アミノ酸残基からなるPCNAのN-末端領域(2-64番)とC-末端領域(197-228番)にそれぞれ独立に機能する結合領域をマップした。興味深いことにこれらの領域は、哺乳動物からショウジョウバエさらに出芽酵母のPCNAにいたるまで、最もよく保存されている領域に相当している。
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[Publications] Matsukage,A.et al.: "Tranccriptional regulation of DNA replication genes in cell grouth…" Jpn.J.Cancer Res.85. 1-8 (1994)
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[Publications] Hirose,F.et al.: "Repression of regulatory factor for Droesphila DNA replication…" J.Biol.Chem.269. 2937-2942 (1994)
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[Publications] Matsuoka,S.et al.: "D-type cyclin binding region of proliferation cell nuclear antigen" J.Biol.Chem.269. 11030-11036 (1994)
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[Publications] Yss,M.A.et al.: "Effect of DNA polymerase β gene over-expressed in trnasgemic" Jpn.J.Genctics. 69. 21-33 (1994)
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[Publications] Yamaguchi,M.et al.: "Differential effect of p53 on the promoters of mouse DNA polymerace" Eur.J.Biochem. 221. 227-237 (1994)
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[Publications] Yamaguchi,M.et al.: "Role fo homeodomain protein-binding region in the expression" Gene Expression. (in press).
