1994 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
06266213
|
|---|
| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
|---|
Principal Investigator |
貝淵 弘三 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (00169377)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中福 雅人 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (80202216)
|
|---|
| Keywords | 遺伝子発現 / G蛋白質 |
|---|
| Research Abstract |
遺伝子発現制御におけるRasの作用機構の解析を行い以下の結果を得た。
(1)RasによるMAPキナーゼの活性化機構
私共はツメガエル卵の細胞質画分からRas依存性にMAPキナーゼ・キナーゼを活性化するのに必要な蛋白質因子(REKS)を部分精製している。昨年度は、REKSがRas依存性にMAPキナーゼ・キナーゼをリン酸化して活性化するプロテインキナーゼであることを明らかにした。また、RasがREKSと複合体を形成することから、REKSはRasの直接のターゲットであると考えている。最近、Rasがc-RAS-1と結合することが報告されているが、REKSがc-Raf-1でないことを確認している。本年度は、ツメガエル卵の細胞質画分からREKSを高度に精製した。また、REKSが牛大脳細胞質画分にも存在することを明らかにし、これを均一蛋白質にまで精製した。ツメガエル卵と牛大脳から精製されたREKSは、ともに分子量約10万のプロテインキナーゼであり、自己リン酸化能を示した。一方、Cキナーゼやホスホリパーゼの制御因子として知られる14-3-3がRasと共同してREKSを活性化することも明らかにした。
(2)新しいRasの標的蛋白質の同定
Rasの標的蛋白質はGTP結合型のRasに特異的に結合してGDP結合型のRasには結合しないと考えられる。そこで、GTP結合型のRasをマトリックスに固定化してアフィニティカラムクロマトグラフィーを行い、Rasの標的蛋白質の同定を試みた。その結果、牛大脳からGTP-Rasに結合する分子量約19万の蛋白質(p190)を分離精製できた。この蛋白質はGDP結合型のRasには結合せず、標的蛋白質結合領域に変異を導入したGTP結合型のRasにも結合しなかった。したがって、この蛋白質はRasの標的蛋白質のひとつであると考えられる。
以上本年度の研究計画はほぼ達成することができたと考えられている。
|
Research Products
(6 results)
-
[Publications] Miki,H.,et al.: "Association of Ash/Grb-2 with dynamin through the Src homology 3 domain." J.Biol.Chem.269. 5489-5492 (1994)
-
[Publications] Nakanishi,H.,et al.: "Different functions of smg GDP dissociation stimulator and mammalian counterpart of yeast Cdc25." J.Biol.Chem.269. 15085-15091 (1994)
-
[Publications] Shimizu,K.et al.: "Synergistic Activation by Ras and 14-3-3 Protein of a MAP Kinase Kinase Kinase Named Ras-dependent ERK Kinase Stimulator(REKS)." J.Biol.Chem.269. 22917-22920 (1994)
-
[Publications] Hirai,S.,et al.: "Ras-dependent signal transduction is indispensable but not sufficient of the activation op AP1/Jun by PKCδ." EMBO J.13. 2331-2340 (1994)
-
[Publications] Wada,K.,et al.: "Localization of Rabphilin-3A,a putative target for Rab3A,at the sites of Ca^<2+>-dependent exocytosis in PC12 cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 158-165 (1994)
-
[Publications] Nakanishi,H.et al.: "Kinetic properties of Ash/Grb2-interactiong GDP/GTP exchange protein." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 1225-1261 (1994)
