1994 Fiscal Year Annual Research Report
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06276210
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
岩崎 博史 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60232659)
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| Keywords | RuvCタンパク質 / エンドヌクレアーゼ / Holliday構造 / 遺伝的相同組換え / X線結晶解析 / 三次元構造 / 活性中心 / DNA結晶タンパク質 |
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| Research Abstract |
遺伝的相同組換えの中間体は、2種の相同な二重鎖DNAが相互に相補鎖DNAを交換して、X字様となったHolliday構造と呼ばれる構造をしている。大腸菌RuvCタンパク質は、このHolliday構造を切断し組換え産物を生成する際に働くエンドヌクレアーゼで,現在までに,遺伝学的にも生化学的にも相同組換え反応に関与することが証明されているHolliday構造特異的エンドヌクレアーゼは唯一RuvCタンパク質だけである。Holliday構造は,DNAの構造としてもユニークな高次構造をもち,それを認識してDNAの分岐鎖の正確に対称な位置で切断するRuvCエンドヌクレアーゼの基質認識機構や切断メカニズムは非常に興味深い。本研究では、このような特徴を持つRuvCタンパク質の構造と機能との相関関係を解明しようとした。本年度の研究成果は以下のとおりである。
(1)蛋白工学研究所の森川博士との協同研究で、RuvCエンドヌクレアーゼの結晶解析を行い、立体構造を明らかにした。
(2)RuvCミュータントの解析から,3つの機能的なドメイン(エンドヌクレアーゼの活性中心,DNA結合,2量体形成)に関与するアミノ酸残基を同定した。
これらのアプローチによって,RuvCの3次元構造と,機能をうまく説明することができた。
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[Publications] Shinagawa,H.,Iwasaki,H.: "Molecular mechanisms of Holliday junction processing in Escherichia coli." Advances in Biophysics. (印刷中).
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[Publications] Ariyoshi,M.,et al.: "Atomic structure of the RuvC resolvase:a Holliday junction specific endonuclease from E.coli." Cell. 78. 1063-1072 (1994)
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[Publications] Ariyoshi,M.,et al.: "Preliminary crystallographic study of Escherichia coli RuvC protein:an endonuclease specific for Holliday junctions." J.Mol.Biol.241. 281-282 (1994)
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[Publications] Takahagi,M.,et al.: "Structual requirements of substrate DNA for binding to and cleavage by RuvC,a Holliday junction resolvase." J.Biol.Chem.269. 15132-15139 (1994)
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[Publications] Ishino,Y.,et al.: "Amino acid sequence motifs essential to 3'-5' exonuclease activity of Escherichia coli DNA polymerase II" J.Biol.Chem.269. 14655-14660 (1994)
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[Publications] 岩崎博史,品川日出夫: "組換え修復の遺伝学と酵素学" 細胞工学. 13. 720-731 (1994)
