1994 Fiscal Year Annual Research Report
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06280125
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| Research Institution | Aichi Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
石橋 正英 愛知県がんセンター, ウイルス部, 部長 (70029776)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松倉 俊彦 国立予研, 腫瘍ウイルス, 主任研究員 (70100097)
神田 忠仁 国立予研, 遺伝子解析, 室長 (60134615)
清水 文七 千葉大, 医・微生物第1, 教授 (10072894)
安本 茂 神奈川がんセンター, 臨床研・分子腫瘍, 主任研究員 (00112342)
藤永 けい 札幌医大, 癌研・生化学, 教授 (10045338)
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| Keywords | ヒトパピローマウイルス / E6蛋白 / E7蛋白 / p53 / two hybrid法 / 接触阻止 / リボザイム / 単鎖抗体 |
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| Research Abstract |
「高発癌性」ヒトパピローマウイルス(HPV)のE6遺伝子はp53欠損マウス線維芽細胞に対してもトランスフォーム活性を示すことを明らかにした。このことは、E6蛋白の標的がp53以外にも存在することを示唆する。この標的蛋白をtwo hybrid法で検索して、4種類の未知のヒト細胞蛋白のcDNA断片を候補として分離した。その中、1種類についてはコードする蛋白の全アミノ酸配列を決定し、抗体の作製にも成功した。また、上述のE6蛋白には細胞接触による増殖阻止を抑制する活性があるが、細胞接触時に特異的に合成される2種類の未知細胞蛋白のcDNAを分離して、そのうち、1種類についてはコードする蛋白の全アミノ酸配列を決定した。
16型HPV(以下、HPV16と略記する)のE7蛋白がげっし類の細胞を不死化する活性には同蛋白のRB結合ドメインを含むN末端40アミノ酸領域に加えて、内部の40-80残基領域が必須であることを示唆する実験結果を得た。
in vitroで合成したHPV16 E6、E7mRNAを、意図した断点で切断する2種のハンマーヘッド型リボザイムを作製した。また、HPV16 E7蛋白に対する単鎖抗体の発現ベクターを作製した。これをSiHa細胞(HPV16DNAを保有するがん細胞株)などに組み込ませると、細胞増殖を特異的に阻害した。
p53バキュロウイルス感染細胞から精製したp53は同じようにして調製したサイクリンA-CDK1(cdc2)複合体キナーゼによってSer315の位置でリン酸化される。p53のDNA配列特異的結合活性はこのリン酸化量に比例して増大する。
精製したDNAポリメラーゼα/プライマーゼ複合体、マウスポリオーマウイスル(MPV)大型T抗原、マウスRP-A、トポイソメラーゼIからなるMPV DNAのin vitro複製系を作製した。この系に、MPVの複製開始点とAP1結合部位を含む300bpの直鎖状2本鎖DNAをを加えると、ATPおよび複製開始点依存的に2本鎖DNAが巻き戻されて一本鎖DNAとなった。また、この系にc-Jun,c-Fosを加えると巻き戻し活性が5倍程度促進された。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Kiyono,T.: "Inhibition of p53-mediated transactivation by E6 of type 1,but not type 5,8,or 47 human papillomavirus of cutaneous origin." J.Virol.68. 4656-4661 (1994)
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[Publications] Inoue,T.: "Correlation between tumorigenicity and expression levels or splicing patterns of transcripts of human papillomavirus type 16 E6 gene." Jpn.J.Cancer Res.85. 357-363 (1994)
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[Publications] Fujinaga,Y.: "Sequence variation of human papillomavirus type 16 E7 in preinvasive and invasive cervical neoplasias." Virus Genes. 9. 85-92 (1994)
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[Publications] Shirasawa,H.: "Transcription-modulatory activity of full-length E6 and E6^*I proteins of human papillomavirus type 16." Virology. 203. 36-42 (1994)
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[Publications] Shimizu,K.: "Alternative splicing of human papillomavirus type-16 E6-mRNA in mouse and monkey cell lines." Int.J.Oncol.4. 971-976 (1994)
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[Publications] Honda,A.: "Human papillomavirus type60-associated plantar wart-ridged wart-." Arch.Dermatol.130. 1413-1417 (1994)
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[Publications] Matsukura,T.: "Identification of genital human papillomaviruses in cervical biopsy specimens:Segregation of specific virustypes in specific clinicopathologic lesions." Intern.J.Cancer. (in press). (1995)
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[Publications] Kanda,T.: "Wild type p53 transactivates both transcription and DNA replication through the DNA binding site." Mol.Cell.Biol.14. 2651-2663 (1994)
