1994 Fiscal Year Annual Research Report
細胞の増殖と分化におけるRas類似G蛋白質の役割と作用機構
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06281241
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
貝淵 弘三 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (00169377)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中福 雅人 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (80202216)
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| Keywords | 増殖 / 分化 / G蛋白質 |
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| Research Abstract |
細胞増殖および分化の制御におけるRas類似G蛋白質の作用機構の解析を行い以下の結果を得た。
1.R-Rasの標的蛋白質の同定
GTP結合型のR-Rasをマトリックスに固定化してアフィニティカラムクロマトグラフィーを行い、R-Rasの標的蛋白質の同定を試みた。その結果、牛大脳からGTP-R-Rasに結合する分子量約10万の蛋白質(p100)を分離精製できた。この蛋白質はGDP結合型のR-Rasには結合せず、標的蛋白質結合領域に変異を導入したGTP結合型のR-Rasにも結合しなかった。また、GTP結合型のH-RasとRhoには結合しなかった。したがって、この蛋白質はR-Rasの標的蛋白質のひとつであると考えられる。この蛋白質の部分アミノ酸配列からcDNAをクローニングしたところ、Ras GAPとホモロジーがあることが判明した。
2.Rhoの標的蛋白質の同定
GTP結合型のRhoをマトリックスに固定化してアフィニティカラムクロマトグラフィーを行い、Rhoの標的蛋白質の同定を試みた。その結果、牛大脳からGTP-Rhoに結合する分子量約12万と14万、16万、18万の蛋白質(p120,p140,p160,p180)を分離精製できた。これらの蛋白質はGDP結合型のRhoには結合せず、標的蛋白質総合領域に変異を導入したGTP結合型のRhoにも結合しなかった。また、GTP結合型のH-RasとR-Rasには結合しなかった。したがって、これらの蛋白質はRhoの標的蛋白質であると考えられる。
以上本年度の研究計画はほぼ達成することができたと考えている。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Miki,H.,et al.: "Association of Ash/Grb-2 with dynamin through the Src homology 3 domain." J.Biol.Chem.269. 5489-5492 (1994)
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[Publications] Nakanishi,H.,et al.: "Different functions of smg GDP dissociation stimulator and mammalian counterpart of yest Cdc25." J.Biol.Chem.269. 15085-15091 (1994)
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[Publications] Shimizu,K.,et al.: "Synergistic Activation by Ras and 14-3-3 Protein of a MAP Kinase Kinase Kinase Named Ras-dependent ERK Kinase Stimulator(REKS)." J.Biol.Chem.269. 22917-22920 (1994)
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[Publications] Hirai,S.,et al: "Ras-dependent signal transduction is indispensable but not sufficient for the activation op AP1/Jun by PKCδ." EMBO J.13. 2331-2340 (1994)
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[Publications] Wada,K.,et al.: "Localization of Rabphilin-3A,a putative target for Rab3A,at the sites of Ca^<2+>-dependent exocytosis in PC12 cells." Biochem,Biophys.Res.Commun.198. 158-165 (1994)
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[Publications] Nakanishi,H.,et al.: "Kinetic properties of Ash/Grb2-interacting GDP/GTP exchange protein." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 1255-1261 (1994)
