1997 Fiscal Year Annual Research Report
ウイルスのエスケープ変異株と細胞表面HLA内ペプタイド分析による肝障害機序の解明
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06404029
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| Research Institution | University of Tokyo |
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Principal Investigator |
小俣 政男 東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (90125914)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
加藤 直也 東京大学, 医学部・附属病院, 医員
松村 雅幸 朝日生命成人病研究所, 消化器科, 部長
白鳥 康史 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (70196624)
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| Keywords | B型肝炎ウイルス(HBV) / HLA / 細胞障害性T細胞 / T細胞受容体 / YMDD motif / C型肝炎ウイルス(HCV) / NS5A / 転写活性化因子 |
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| Research Abstract |
B型肝炎ウイルス(HBV)
HBV DNAが組み込まれ,増殖するヒト肝癌細胞(HepG22.2.15)から,モノクローナル抗体を用いたアフィニティクトマトグラフィーにてHLAを分離し,結合peptideの一次構造解析をHPLC-mass spectrometry(LC/MS/MS)にて行い,NPLPQLPQLという配列を有する9個のpeptideの同定に成功した.
HBVキャリアにおける病態とHBVのアミノ酸変異についてHBVの全塩基配列を調べ,肝障害が強くなるほどcore領域およびPre-S領域にアミノ酸変異が起こることを明らかにした.
Inverse PCR,doning,sequencingによりCTLにおけるT細胞受容体(TCR)α鎖の遺伝子構造解析を行い,レパートリーの決定を試みた.肝内浸潤リンパ球においては,高頻度のVα7.2遺伝子の使用が見られ,大部分がJα33遺伝子と結合していることを明らかにした.
long-PCR法により3.2kbのHBV DNA全長をone-stepにて増幅する方法を確立した.また,得られたfull-length HBV DNAをdoningし,ヒト肝癌細胞(Huh7)にtransfectionすることにより複製,増殖する系を確立した.この系を用いて,HBV DNA polymeraseのreverse transcriptase活性中心であるYMDD motifに異変を導入し,複製能,逆転写酵素阻害剤であるlamivudineに対する薬剤耐性につき検討した.MetをVal,Leu,Ile,Alaに置換した変異HBV DNAは複製能が認められたが,Lys,Thr,Argに置換した変異HBV DNAには複製能がなかった.またVal,Ileに置換した変異HBV DNAはlamivudine耐性であることが判明した.
C型肝炎ウイルス(HCV)
N端領域を欠失したHCV NS5A蛋白が酵母およびヒト肝癌細胞(Huh7)において強い転写活性化能を示すことを見出した.C型肝炎における肝発癌にNS5Aが関与している可能性がある.
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[Publications] Shiratori Y: "Predictors of the efficacy of interferm therapy in chronic hepatitis C virus infectin" Gastroenterology. 113. 558-566 (1997)
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[Publications] Shiratori Y: "Does dual infection by hepatitis B and C viruses play an inpatant role in the pathogenesis of hepatocellular carcinoma in Japan." Cancer. 80. 2060-2067 (1997)
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[Publications] Kato N: "Hepatitis C virus nonstructural regin 5A plotein is a potent transcriptional activator." J Virol. 71. 8856-8859 (1997)
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[Publications] Shiratori Y: "Quantitative assays for hepatitis virus in serum as predictors of the long term response to interferon." J Hepatol. 27. 437-444 (1997)
