1994 Fiscal Year Annual Research Report
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06404083
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| Research Institution | Okazaki National Research Institutes |
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Principal Investigator |
月田 承一郎 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 教授 (50155347)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
米村 重信 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 助手 (60192811)
永渕 昭良 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 助手 (80218023)
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| Keywords | 相同組換え / αカテニン / βカテニン / ZO-1 / ラディキシン / モエシン / エズリン |
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| Research Abstract |
ES細胞を用いた相同組換え法により、AJ裏打ちの3つの蛋白質をコードする遺伝子をダブルノックアウトし、できたそれぞれのnull-ES細胞を試験管内で旋回培養してembryoid bodyを作らせることにより、上皮細胞に分化させる。この細胞の増殖能と上皮への分化能(極性形成など)を詳細に解析することにより、AJの細胞膜裏打ち蛋白質の細胞増殖と分化における機能を明らかにすることが、本研究の目的であった。
本年度は、ラディキシンに似たモエシン、αカテニン、βカテニン、220kD蛋白質(ZO-1)のcDNAを用いてgenomic libraryをスクリーニングし、それぞれの遺伝子の頭の部分を釣り上げた。これらを用いて、2種類の異なる薬剤耐性を利用して、それぞれの遺伝子を2つ(相同染色体にのっているもの)とも破壊することを試みた。
(1)モエシン遺伝子のノックアウト(担当:米村重信)
(2)カテニン遺伝子のダブルノックアウト(担当:永淵昭良)
(3)220kD蛋白質(ZO-1)遺伝子のノックアウト(担当:米村重信)
(4)ES細胞の上皮への分化誘導(担当:永淵昭良)
ES細胞を旋回培養することにより、embryoid bodyを作製すると、その表面が上皮細胞に分化する。この系を確実に動くようにし、その過程を蛍光顕微鏡法、電子顕微鏡法で追跡できるように準備した。
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[Publications] Kasahara,H.: "Autoimmune myocarditis induced in mice by c-protein." J.Clin.Invest.94. 1026-1036 (1994)
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[Publications] Nagafuchi,A.: "The nervous tissue-specific loss of the expression of alpha-catenin,the 102kD cadherin-associated protein,during development." Develop.Growth & Differ.36. 59-71 (1994)
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[Publications] Takeuchi,K.: "Perturbation of cell adhesion and microvilli formation by antisense oligonuclotides to ERM family members." J.Cell Biol.125. 1371-1384 (1994)
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[Publications] Takeuchi,K.: "Structural diversity of band 4.1 superfamily members." J.Cell Sci.107. 1921-1928 (1994)
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[Publications] Tsukita,S.: "ERM family members as molecular linkers between the cell surface glycoprotein CD44 and actin-based cytoskeletons." J.Cell Biol.126. 391-401 (1994)
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[Publications] Nagafuchi,A.: "The roles of catenins in the cadherin-mediated cell adhesion: Functional analysis of E-cadherin-alpha catenin fusion molecules." J.Cell Biol.127. 602-613 (1994)
