1995 Fiscal Year Annual Research Report
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06404083
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
月田 承一郎 京都大学, 医学研究科, 教授 (50155347)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
米村 重信 京都大学, 医学研究科, 講師 (60192811)
伊藤 雅彦 京都大学, 医学研究科, 助手 (70270486)
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| Keywords | ラディキシン / αカテニン / Z0-1 / ノックアウト / 相同組換え / ES細胞 / 上皮細胞 / ERM蛋白質 |
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| Research Abstract |
マウスのES細胞は(embryonic stem cell)を用いた相同組換えによる遺伝子ノックアウト法は、近年、飛躍的な進歩を見せた。我々の研究室においても、この技術が導入されて、利用することが可能となった。我々は、以下のように、まず、この方法を用いて細胞レベルで各遺伝子をダブルノックアウトし、出来たnull-細胞の性質の解析を徹底的に行なった後に、その結果を踏まえて、個体レベルでの解析も行った。まず、ラディキシン、αカテニン、220kD蛋白質のcDNAを用いてgenomic libraryをスクリーニングし、それぞれの遺伝子の頭の部分を釣り上げた。これらを用いて、2種類の異なる薬剤耐性を利用して、それぞれの遺伝子を2つ(相同染色体にのっているもの)とも破壊した。そして、得られた各ダブルノックアウト細胞とそれらを上皮に分化させた系を用いて以下の点を調べた。
また、必要に応じて、ノックアウトマウスを作製した。
a.細胞増殖速度:特に接触阻害が起こるか?
b.いわゆるトランスフォームしているか?
c.上皮への分化能が残っているか?
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[Publications] Yonemura, S. et. al.: "Cell-to-cell adherens junction formation and actin filament organization : Similarties and difference between non-polarized fibroblasts and polarized epithelial cells." J. Cell Sci.108. 127-142 (1995)
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[Publications] Oyama, T. et. al.: "A truncated beta-catenin disrupts the interaction between E-cadherin and alpha-catenin : A cause of loss of intercellular adhesiveness in human cancer cell lines" Cancer Res.54. 6268-6287 (1995)
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[Publications] Takeda, H. et. al.: "V-src kinase shifts the cadherin-based cell adhesion from the strong to the weak state and beta-catenin is not requied for the shift." J. Cell Biol.131. 1839-1847 (1995)
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[Publications] Furuse, M. et. al.: "Overexpression of occludin, a tight junction-associated integral membrane protein, induces the formation of intracellular multilamellar bodies bearing tight junction-like structures" J. Cell Sci.109. 429-425 (1996)
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[Publications] Tokai, N. et. al.: "Kid, a novel kinesin-like DNA binding protein, is localized to chromosomes and the mitotic spindle" EMBOJ.15 (in press). (1996)
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[Publications] Ando-Akatsuka, Y. et. al.: "Interspecies diversity of the occludin sequence : cDNA cloning of human, mouse, dog and rat-kangaroo homologues" J. Cell Biol.(in press). (1996)
