1994 Fiscal Year Annual Research Report
微生物のアミン、アミノ酸代謝酵素の構造と機能に関する研究-応用をめざして-
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06453168
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Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
熊谷 英彦 京都大学, 農学部, 教授 (70027192)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
玉置 尚徳 京都大学, 農学部, 助手 (20212045)
鈴木 秀之 京都大学, 農学部, 助手 (10202136)
山本 憲二 京都大学, 農学部, 助教授 (70109049)
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| Keywords | チロシンフェノールリアーゼ / γ-グルタミルトランスフェラーゼ / グルタチオンS-トランスフェラーゼ / アミン酸化酵素 / X線結晶解析 |
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| Research Abstract |
(1)高純度チロシンフェノールリアーゼ(TPL)を大量に調製し、ホロ酵素の結晶化条件を検討した。クエン酸と酢酸の混合緩衝液中でPEG4000を用いて大きな結晶を得た。一方Escerichia intermedia TPLのホロ酵素の立体解析がなされ、平成6年の国際会議で発表された。今後はこのデータに基づいて、Erwinia herbicola TPLの構造解析を進める。
(2)γ-グルタミルトランスフェラーゼ(GGT)結晶の基礎的なデータに基づいて、3.5Aの分解能での電子密度モデルを作製した。また重元素同型置換体を作成しそのデータの収集を行った。その結果主鎖構造の立体構造モデルが作製されるに至っている。全構造の解明までもうわずかである。
(3)高純度グルタチオンS-トランスフェラーゼを調製し、結晶化の条件を種々検索しているが、X線結晶解析に適した結晶は得られていない。いまだに酵素の安定調製、結晶の析出に困難がある。
(4)大腸菌アミン酸化酵素(AO)の精製結晶化を行い、またその諸性質について報告した。結晶の基礎的データを得て、論文として報告した。非常によい結晶を得ており、解析を進めている。今後は重元素置換体の取得が問題となる。これとは別にAspergillus nigerのAOのcDNAのクローニング及び酵母における発現に成功した。A.nigerAOについても結晶を得ており、そのX線リフラクションが良ければ解析が進むと考えられる。
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[Publications] H.Suzuki.et al: "Escherichia coli k-12 can utilize an exogenous γ-glutamyl peptide as an amino acid source,for which γ-glutamyltranspeptidase is essential." J.Bacteriol.175. 6038-6040 (1993)
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[Publications] H.Kumagai,et al: "Crystallization and preliminary X-ray analysis of γ-glutamyltranspeptidase from Escherichia coliK-12." J.Mol.Biol.234. 1259-1262 (1993)
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[Publications] Jung Hyeob Roh,et al: "Crystallization and preliminary X-ray analysis of copper amine oxidase from Escherichia coliK-12." J.Mol.Biol.238. 635-637 (1994)
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[Publications] Jung Hyeob Roh,et al: "Purification,characterization,and crystallization of monoamine oxidase from Eschericha coliK-12." Biosci.Biotech.Biochem.58. 1652-1656 (1994)
