1995 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子ノックアウト→レスキューの戦略によるシオン軽鎖キナーゼの生理機能の解析

Research Project

Project/Area Number	06454156
Research Institution	Gunma University
Principal Investigator	小浜一弘群馬大学, 医学部, 教授 (30101116)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	石川良樹群馬大学, 医学部, 助手 (20212863) 岡垣壮群馬大学, 医学部, 講師 (80185412)
Keywords	平滑筋 / ミオシン軽鎖キナーゼ / カルシウムイオン / アンチセンス / 収縮制御 / 制御蛋白質 / りん酸化
Research Abstract	平滑筋の収縮がCa^<2+>より制御されていることに関しては、現在、まず異論はないと考えられている。この制御に関しては、ミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)によるミオシン軽鎖のリン酸化を介しているとのリン酸化説が主流的である。しかし最近の先端技術のとれ入れにより生理・薬理学的知識は増大し、この明快なミオシン連関制御のみでは説明できなくなって来た。私どもは、後者が次のようにアクチンに連関した強力な制御作用のあることを明らかにした。 i)アクチンと結合して、アクトミオシン系に抑制作用をかけること。 ii)この作用はCa^<2+>存在下のカルモジュリンで解除されること。しかし、実際にどの様に平滑筋細胞内(in vitro)で機能しているか不明の点が多い。本研究では、i)MLCKのcDNAを利用して大腸菌内でアクチン結合部位を合成させ機能部位を決定することであるが、pET発現ベクター系を用い種々の長さのMLCKを得て、N末端の41残基に機能部位の局在することをつきとめた。次に、ii)平滑筋細胞でMLCKのアンチセンスcDNAを利用してMLCKをノックアウトすることであるが、レトロウイスルpCXLp-プラスミドを平滑筋株SM-3にトランスフェクトさせ、stable transformantを得た。この細胞ではMLCKの発現レベルが下っていた。現在、この細胞の機能を検討中である。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Sato, M.: "Myosin light chain kinase from vascular smooth muscle inhibits the ATP-dependent interaction between actin and myosin by binding to actin" J. Biochem.118. 1-3 (1995)
[Publications] Hayakawa, K.: "Reversible effects of Okadaic acid and Microcyotin-LR on the ATP-dependent interaction between actin and myosin." J. Biochem.117. 509-514 (1995)
[Publications] Higashi-Fujime, S.: "The fastest actin-based motor protein from the green alga, Chara, and its distinct mode of interaction with actin." FEBS Lett.375. 151-154 (1995)
[Publications] Ishikawa, R.: "Purification of an ATP-dependent actin-binding protein from a lower eukaryote, Physarum polycepharum." Biochem. Biophys. Res. Commun.212. 347-352 (1995)
[Publications] Kohama, K.: "Smooth muscle contraction. New regulatory modes." Japan Sci. Soc. Press & S. Karger, 159 (1995)
[Publications] Maruyama, K.: "Calcium as cell signal" Igaku-Shoin, 293 (1995)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子ノックアウト→レスキューの戦略によるシオン軽鎖キナーゼの生理機能の解析

Principal Investigator

小浜 一弘 群馬大学, 医学部, 教授 (30101116)

Research Products

[Publications] Sato, M.: "Myosin light chain kinase from vascular smooth muscle inhibits the ATP-dependent interaction between actin and myosin by binding to actin" J. Biochem.118. 1-3 (1995)

[Publications] Hayakawa, K.: "Reversible effects of Okadaic acid and Microcyotin-LR on the ATP-dependent interaction between actin and myosin." J. Biochem.117. 509-514 (1995)

[Publications] Higashi-Fujime, S.: "The fastest actin-based motor protein from the green alga, Chara, and its distinct mode of interaction with actin." FEBS Lett.375. 151-154 (1995)

[Publications] Ishikawa, R.: "Purification of an ATP-dependent actin-binding protein from a lower eukaryote, Physarum polycepharum." Biochem. Biophys. Res. Commun.212. 347-352 (1995)

[Publications] Kohama, K.: "Smooth muscle contraction. New regulatory modes." Japan Sci. Soc. Press & S. Karger, 159 (1995)

[Publications] Maruyama, K.: "Calcium as cell signal" Igaku-Shoin, 293 (1995)

小浜一弘群馬大学, 医学部, 教授 (30101116)