1994 Fiscal Year Annual Research Report
シクロオキシゲナーゼとリポキシゲナーゼのアイソザイム
Project/Area Number |
06454179
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Research Institution | The University of Tokushima |
Principal Investigator |
山本 尚三 徳島大学, 医学部, 教授 (50025607)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 啓史 徳島大学, 医学部, 助手 (80253194)
林 陽子 徳島大学, 医学部, 助手 (60035441)
上田 夏生 徳島大学, 医学部, 助教授 (20193807)
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Keywords | アラキドン酸 / プロスタグランジン / アナンダミド / リポキシゲナーゼ / 12-リポキシゲナーゼ / シクロオキシゲナーゼ-1 / シクロオキシゲナーゼ-2 / バキュロウイルス |
Research Abstract |
不飽和脂肪酸のアラキドン酸から生理活性物質が作られる代謝系で、生合成を律速調節するのがシクロオキシゲナーゼとリポキシゲナーゼのような酵素添加酵素である。私達は、その1つの12-リポキシゲナーゼに2種類のアイソザイムが存在することを見出した。また、従来知られていたシクロオキシゲナーゼとは区別されるアイソザイムが発見され、現在活発な研究の対象となっている。 1)12-リポキシゲナーゼ遺伝子の構造と機能の解明(分担 山本尚三):12-リポキシゲナーゼの2つのアイソザイムのゲノムDNAはすでに単離されており、このうちヒトの血小板の酵素の転写調節因子の解析が進められた。ルシフェラーゼ遺伝子をリポーターとして使い、5'端上流-539からの-530に見出されNFkBモティーフが、周辺のAP-2モティーフなどと関連しつつ、12-リポキシゲナーゼ遺伝子の発現を陰に調節していることを明らかにした。 2)12-リポキシゲナーゼのアナンダミドとの反応性(分担 上田夏生):カンナビノイド受容体の内因性リガンドとして見出されたアナンダミド(アラキドニルエタノールアミド)と、種々のリポキシゲナーゼとの反応性を調べたところ、15-リポキシゲナーゼと白血球型12-リポキシゲナーゼが、アラキドン酸と大差のない活性を示すことが見出された。 3)抗シクロオキシゲナーゼ-2抗体の調製(分担 林陽子):シクロオキシゲナーゼ-2の動態を追究するために、シクロオキシゲナーゼ-2に特異的なペプチドを抗原としてウサギに注射して、ポリクローナル抗体を調製して、ウエスタンブロット法に適用した。 4)シクロオキシゲナーゼ-2のリコンビナント酵素標品の調節(分担 鈴木啓史):マウス骨芽細胞MC3T3-E1からクローニングしたシクロオキシゲナーゼ-2のcDNAを含むプラスミッドでバキュロウイルスを構築し、カイコの卵の発現させた。
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[Publications] Suzuki,H.: "Site-directed mutagenesis studies on the iron-binding domain and the determinant for the substrate oxygenation site of porcine leukocyte arachidonate 12-lipoxygenase" Biochim.Biophys.Acta. 1210. 308-316 (1994)
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[Publications] Hada,T.: "Arachidonate 12-lipoxygenase ofrat pineal glands:catalytic properties and primary structure deduced from its cDNA" Biochim.Biophys.Acta. 1211. 221-228 (1994)
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[Publications] Gu,J.-L.: "Evidence that a leukocyte type of 12-lipoxygenase is expressed and regulated by angiotensin II in human adrenal glomerulosa cells" Endocrinology. 134. 70-77 (1994)
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[Publications] Liu,Y.-W.: "Induction of 12-lipoxygenase expression by epidermal growth factor is mediated by protein kinase C in A431 cells" J.Pharmacol.Exp.Ther.271. 567-573 (1994)
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[Publications] Takahashi,Y.: "Studies on the induction of cyclooxygenase isozymes by various prostaglandins in mouse osteoblastic cell line with reference to signal transduction pathways" Biochim.Biophys.Acta. 1212. 217-224 (1994)
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[Publications] Harada,Y.: "Detection of inducible prostaglandin H synthase-2 in cells in the exudate of rat carrageenin-induced pleurisy" Biomed.Res.15. 127-130 (1994)