高親和性IgEレセプター(FcεRI)によるIgE産生の調節

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06454224
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 羅 智靖 順天堂大学, 医学部, 講師 (60230851)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 柳原 行義 国立小児病院, 小児医療研究センター, 室長 (00166547)
• Keywords: アレルギー / IgE / 高親和性IgEレセプター / B細胞 / インターロイキン4 / IgE産生 / クラススウィッチ

Research Abstract

ヒト高親和性IgEレセプター(FcεRI)の、IgE結合サブユニットであるα鎖を遺伝子工学的に可溶化し(solubleα)、このsoluble αによるIgE産生の調節機構を検討した。
1.soluble αの存在下とヒトIgE定量系の確立
IgEはそのCε3ドメインでsoluble αに結合するので、Cε3以外の部位のエピトープを認識する抗IgE抗体を用いて、soluble α添加によっても影響されないIgEの測定系を確立した。
2.soluble αによるヒト末梢血B細胞のIgE産生の抑制
アレルギー患者末梢血から白血球を分離して実験に供した。(1)IL-4+T細胞+B細胞の系:さらにリンパ球を分離して、これをT細胞+B細胞のソースとして、IL-4 を添加し、T細胞-B細胞のcognate interactionによるIgEの産生系とした。(2)IL-4+抗CD40mAb+B細胞の系:リンパ球分画よりT細胞を除き、B細胞分画を得て、IL-4,抗CD40mAbを添加してnon-cognate interactionによるIgE産生系とした。(3)IL-4+ハイドロコーチゾン+B細胞の系。
上記の(1)〜(3)のいずれの系においても、soluble αは濃度依存性にIgE産生を抑制した(1.において確立したIgE測定系(RIA)を用いて、培養上清中の分泌IgEを定量)。(4)末梢血単核球をPWMで刺激して、IgG,IgM,IgAの産生を測定したが、soluble αはIgE以外の他のクラスのIgE産生には影響を及ぼさなかった。
3.soluble αの標的細胞
抗FcεRIα鎖抗体(IgEと競合しない抗体)を用いて、soluble αが結合する細胞を同定した。末梢血CD14^+単球、CD3^+T細胞には結合せず、CD20^+のB細胞分画のみsoluble αを結合した。
4.soluble αの結合分子
soluble αのB細胞への結合は、過剰のIgE、あるいは、抗FcεRIα鎖抗体(IgEの結合部位を認識)によって特異的に阻害された。
IgE産生の抑制機構
soluble αはgerm line Cε mRNAの産生には影響せず、productive Cε mRNAの産生のみを抑制することが明らかになった。
以上よりsoluble αはB細胞上の模型IgEに特異的に結合して、productive Cε mRNAの産生を抑制し、クラス特異的にIgE産生を阻止することが解明された。

Research Products

• [Publications] Naito,K.: "Recombinant soluble form of the human high affinity receptor for IgE inhibits anaphylactic shock in mice." J.Aller.Clin.Immunol.(in press). (1994)
• [Publications] Naito,K.: "Soluble form of the human high affinity receptor for IgE inhibits recurrent allergic reaction in a novel mouse model of type I allergy." Eur.J.Immunol.(in press). (1994)
• [Publications] Yanagihara,Y.: "Recombinant soluble form of the human high-affinity immunoglobulin E(IgE)receptor inhibits IgE production through its specific binding to IgE-bearing B cells." J.Clin.Invest.94. 2162-2165 (1994)
• [Publications] Yagi,S.: "High-level expression of the truncated α chain of FcεRI as a soluble form by baculovirus infected insect cells:Biochemical characterization of the recombinant product." Eur.J.Biochem.220. 593-598 (1994)
• [Publications] Yagi,S.: "Cloning of the cDNA for the deleted SYK kinase homologous to ZAP-70 from human basophilic leukemia cell line (KU812)." Biochem.Biophys Res.Commun.200. 28-34 (1994)
• [Publications] Shirakawa,T.: "Association between atopy and variants of the β subunit of the high affinity immunoglobulin E receptor." Nature Genetics. 7. 125-130 (1994)
• [Publications] Nakahata,T.: "Biological and molecular aspects of mast cell and basophil differentiation and function." Yamamoto,S.,Kitamura,Y.,et al.Raven.Press.Inc.New York.(in press), (1994)
• [Publications] Ra,C.: "Biological and molecular aspect of mast cell and basophil differentiation and function." Yanamoto,S.,Kitamura,Y.,et al.Raven.Press.Inc.New York.(in press), (1994)