1994 Fiscal Year Annual Research Report
アンチセンスDNAの細胞内動態及び膜透過性に関する研究
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06454252
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
嶋田 甚五郎 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (50056701)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
水島 裕 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (40010409)
東海林 洋子 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (00235714)
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| Keywords | 単純ヘルペスウイルスI型 / アンチセンスDNA / S-oligo / 共焦点レーザー蛍光顕微鏡システム |
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| Research Abstract |
今年度の研究では、単純ヘルペスウイルス(HSV)I型のimmediate early pre-mRNAに対するアンチセンスDNAのフォスフォロチオエ-ト型(S-oligo)をモデルオリゴとし、共焦点レーザー蛍光顕微鏡システム(CLSM)による細胞内分布の観察のため、蛍光標識S-oligoの合成を行った。蛍光標識したS-oligoの細胞抽出液中での安定性を確認し,CLSMによる観察中、遊離の蛍光マーカーを観察していないことを確認した。S-oligoは殆ど核に存在しないことから、作用点まで到達していないことが示唆されていた。しかし、S-oligoには抗ヘルペス効果が認められており、メカニズムに疑問があった。そこで、Vero細胞において、HSV-Iを感染させた細胞と感染させない細胞を用いて、蛍光標識S-oligoの細胞内分布をCLSMにて観察した。ウイルス非感染細胞では、細胞質に点状に存在し、核には殆ど認められなかった。ところが、ウイルス感染細胞では、細胞質に均質に分布するようになり、核への分布も認められるようになった。本年度の研究で、ウイルスの存在により、S-oligoの細胞膜透過性が異なることが示唆され、作用点まで到達している可能性を示し、現在検討中である。
ここで、問題になったのは、ウイルスに感染した細胞かどうかの判定であり、抗HSV-I抗体を用いて直接蛍光抗体法にて確認した。
S-oligoの適応として、角膜ヘルペスが考えられ、角膜移行性を検討するために、拡散チャンバーによる実験をを計画した。しかし、阪神大震災の影響のため、拡散チャンバーの入荷が大幅に遅れ、現在セットアップ中である。
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[Publications] 東海林洋子、嶋田甚五郎 他: "チオール化アンチセンスDNAのCH^RC5細胞における取り込み機構と細胞内分布" Drug Delivery System. 9. 19-24 (1994)
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[Publications] N.Tamura,J.Shimada,et al.: "Antiviral effects of phosphorothioate oligonucleotides complementary to 3′splice region of herpes simplex virus immediate early pre-mRNA5" Nucleic Acids Symposium Series. 31. 73-74 (1994)
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[Publications] H.Nakashima,J,Shimada,et al.: "Anti-human immunodeficiency virus type 1 activity of phosphrothioate analogs of oligodeoxynucleotides:penetration and localization of oligodeoxynucleotides in HIV-infected MOLT-4 cells." Nucleic Acids Res.22. 5004-5010 (1994)
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[Publications] 東海林洋子、嶋田甚五郎 他: "アンチセンスDNAの細胞内分布に及ぼす要因" Drug Delivery System. (印刷中).
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[Publications] S-G.Kim,J.Shimada,et al.: "Synthesis and anti-HIV activities of 5′-linked lipid-oligodeoxynucleotide derivatives." Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press).
