1996 Fiscal Year Annual Research Report
ジストロフィン関連蛋白に結合する膜糖蛋白質複合体の構造解析
| Project/Area Number |
06454280
|
|---|
| Research Institution | Teikyo University |
|---|
Principal Investigator |
清水 輝夫 帝京大学, 医学部, 教授 (00107666)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
斉藤 史明 帝京大学, 医学部, 助手 (40286993)
松村 喜一郎 帝京大学, 医学部, 助教授 (50260922)
|
|---|
| Keywords | dystroglycan / laminin / Dp116 / utrophin / adhalin / DMD |
|---|
| Research Abstract |
ウシ末梢神経の膜画分よりアルカリ抽出・WGA-Sepharoseおよびlaminin-Sepharoseカラムクロマトグラフィーによりα-dystroglycanを精製した.アルカリ分解または弱ヒドラジン分解によりO結合型糖鎖を切り出し,陰イオン交換・ゲル濾過・レクチン・逆相の各種カラムクロマトグラフィーおよび酵素処理によりその構造を解析した.各種シアル化オリゴ糖のα-dystroglycanとlamininの結合に対する阻害効果も検討した.シアル酸はDMB法により定量した.α-Dystroglycan 1 mol当たり約15molのシアル酸が検出され.そのうち約80%がN-acetyl体,20%がN-glycoryl体であった.O-acetyl体は検出されなかった.Sialidaseの効果にSiaα2-3Gal結合を特異的に切断するNewcastle disease virus由来のものとすべての結合を切断するArthrobacter ureafaciens由来のものとに差は見られず,シアル酸の結合様式はα2-3が主要なものと考えられた.Sialidaseにより中性化したオリゴ糖はゲル濾過で3.9グルコース単位(GU)の位置に主要な溶出ピークを与え,このオリゴ糖はGalβ1-4GlcNAc結合のみを特異的に切断する肺炎双球菌由来のβ-galactosidaseにより2.9GUに消化され,さらに肺炎双球菌由来のβ-hexosaminidaseにより0.8GUにまで消化され,還元末端糖はmannoseであることが判明した.肺炎双球菌由来のβ-galactosidase消化後の2.9GUのオリゴ糖は,還元末端のGlcNAc残基を特異的に認識するPVLレクチンカラムに結合し,また逆相カラムにてGlcNAcβ1-2Manの標準品と同一の位置に溶出した.よってα-dystroglycanの主要なO結合型シアル化オリゴ糖はSiaα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-2Man-Ser/Thrの構造を有するO-mannosyl型のものである.この糖鎖の非還元末端部分と同じ構造を持つ3'-sialyl N-acetyllactosamine(Siaα2-3Gal/β1-4GlcNAc)によりα-dystroglycanとlamininとの結合が阻害された.本構造はこれまで報告されていない新規糖鎖である.
|
-
[Publications] Yamada H et al.: "Dystroglycan is a dual receptor for agrin and laminin in Schwann......" Journal of Biological Chemistry. 271. 23418-23423 (1996)
-
[Publications] Yamada H et al.: "Characterization of dystroglycan-laminin interaction in peripheral nerve" Journal of Neurochemistry. 66. 1518-1524 (1996)
-
[Publications] 蔡偉超ら: "原発生胆汁性肝硬変と心筋障害を合併しdystrophinカルボキシル......" 臨床神経. 36. 876-880 (1996)
-
[Publications] Yamada H et al.: "Secretion of laminin α2 chain in cerebrospinal fluid" FEBS Letters. 376. 37-40 (1995)
-
[Publications] Yamada H et al.: "Laminin abnormalities in severe childhood autosomal recessive......" Laboratory Investigation. 72. 715-722 (1995)
-
[Publications] Kawai H et al.: "Adhalin gene mutations in patients with autosomal recessive......" Journal of Clinical Investigation. 96. 1202-1207 (1995)
