1995 Fiscal Year Annual Research Report

c-kit抗体MTK1を用いたヒト造血幹細胞の単離と遺伝子導入細胞としての的確性

Research Project

Project/Area Number	06454295
Research Institution	INSTITUTE FOR DEVELOPMENT,AGING AND CANCER (IDAC) Tohoku University
Principal Investigator	土屋滋東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (30124605)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	大橋芳之東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (60250825) 今野多助東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (00004846)
Keywords	造血幹細胞 / c-kit / IL-2セレプターγ鎖 / エレクトロポレーション / 遺伝子導入 / BCR / ABL
Research Abstract	1.抗c-kit(CD117)抗体の作成:ヒト巨核芽急性白血病細胞株M-MOKをBalb/cマウスに免疫することによりヒトc-kitに特異性を有する2単クローン抗体、MTK1とMTK2を作成した。 2.MTK1抗体による骨髄コロニー形成細胞の濃縮:抗CD34抗体と免疫磁気ビーズ法により、CD34陽性細胞の分離法を確立したあとで、MTK1抗体と免疫磁気ビーズを組み合わせて造血幹細胞の濃縮を試みた。CFU-GMとBFU-Eで検討した結果、c-kit抗体でもコロニー形成細胞の濃縮が可能なことが、明らかになった。 3.白血病細胞と白血病細胞株でのc-kitの発現:c-kitは骨髄性白血病細胞の約70%に発現していた。樹立細胞株では4株中4株の巨核芽球性白血病細胞株に優位に発現が認められた。 4.骨髄及び臍帯血CD34陽性細胞へのIL-2Rγ鎖の発現:CD34陽性細胞の約40%にIL-2Rγ鎖が存在した。FACSortによりCD34(+)IL-2Rγ鎖(+)分画とCD34(+)IL-2Rγ鎖(-)分画に分離すると後者により多いBFU-Eが観察された。 GM-CSF依存性白血病細胞株M-MOKへのbcr/abl導入実験:造血幹細胞への遺伝子導入の予備実験として、エレクトロポレーション法によりM-MOKにbcr/ablを導入し得た。しかしこのことによりM-MOKをGM-CSF非依存性へと変換することは出来なかった。ヒト造血幹細胞へ遺伝子を導入するためには、標的細胞についてもベクターについても、解決すべき問題点が山積みされているように思われた。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Minegishi N et al.: "Erhthropoietin-dependent induction of hemoblobin synthesis in a cytokine-dependent cell line M-TAT" J Biol Chemist. 269. 27700-27704 (1994)
[Publications] Ishii N et al.: "Impairment of ligand binding and growth signaling of mutant IL-2 receptor γ-chains in patients with X-linked severe combined immunodeficiency" J Immiunol. 153. 1310-1317 (1994)
[Publications] Fujie H et al.: "bcr/abl mRNAs in leukemic blasts of an unusual patient with acute lymphoblastic leukemia after 5-year remission by chronic myelogenous leukemia in blast crisis" Leukemia. 8. 1592-1595 (1994)
[Publications] Ohashi Y et al.: "A new point mutaion involving a highly conserved leucine in the Btk SH2 domain in a family with X-linked agammaglobulinemia" J Med Genet. 32. 77-79 (1995)
[Publications] Itano M et al.: "Establishment and characterization of a novel human immature megakaryoblastic leukemia cell line,M-MOK,dependent on ffibroblasts for its viability" Exp Hematol. 23. 1301-1309 (1995)
[Publications] Morita S: "Cell surface c-kit receptors in human leukemia cell lines and pediatric leukeima:Selective oreservation of c-kit expression on megakaryoblastic cell lines." Leukemia. 10. 102-105 (1996)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

c-kit抗体MTK1を用いたヒト造血幹細胞の単離と遺伝子導入細胞としての的確性

Principal Investigator

土屋 滋 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (30124605)

Research Products

[Publications] Minegishi N et al.: "Erhthropoietin-dependent induction of hemoblobin synthesis in a cytokine-dependent cell line M-TAT" J Biol Chemist. 269. 27700-27704 (1994)

[Publications] Ishii N et al.: "Impairment of ligand binding and growth signaling of mutant IL-2 receptor γ-chains in patients with X-linked severe combined immunodeficiency" J Immiunol. 153. 1310-1317 (1994)

[Publications] Fujie H et al.: "bcr/abl mRNAs in leukemic blasts of an unusual patient with acute lymphoblastic leukemia after 5-year remission by chronic myelogenous leukemia in blast crisis" Leukemia. 8. 1592-1595 (1994)

[Publications] Ohashi Y et al.: "A new point mutaion involving a highly conserved leucine in the Btk SH2 domain in a family with X-linked agammaglobulinemia" J Med Genet. 32. 77-79 (1995)

[Publications] Itano M et al.: "Establishment and characterization of a novel human immature megakaryoblastic leukemia cell line,M-MOK,dependent on ffibroblasts for its viability" Exp Hematol. 23. 1301-1309 (1995)

[Publications] Morita S: "Cell surface c-kit receptors in human leukemia cell lines and pediatric leukeima:Selective oreservation of c-kit expression on megakaryoblastic cell lines." Leukemia. 10. 102-105 (1996)

土屋滋東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (30124605)