1995 Fiscal Year Annual Research Report
部位突然変異法を用いたアンジオテンシンリセプターの情報伝達機構の解明
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06454298
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| Research Institution | 山梨医科大学 |
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Principal Investigator |
大山 健司 山梨医科大学, 医学部, 助教授 (80051861)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐野 友昭 山梨医科大学, 医学部, 医員
中込 美子 山梨医科大学, 医学部, 医員 (20198055)
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| Keywords | 部位突然変異法 / アンジオテンシンII / アンジオテンシンIIリセプター / 細胞内情報伝達 / G蛋白 / CHO-K1細胞 |
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| Research Abstract |
アンジオテンシンII(AII)リセプターtypeI(AT_1)は、血管内皮、脳、副腎、腎、肺、心等、多臓器に存在し、血圧調節と体液バランスの維持に重要な役割をはたしている。本研究では、AT_1の三次構造とAIIのコンピューター解析から、4ケ所のイオン結合部位を推測し、作製した変異リセプターのリガンド結合能の変化から、リガンド結合部位を明らかにした。即ち、AT_1の三次構造のコンピューター解析した結果、His^<166>,Arg^<167>,Glu^<173>,Lys^<199>,Asp^<263>がAIIとのイオン結合に重要と推測された。Lys^<199>はGlnに置換した変異リセプターのリガンド結合能が著明に低下した。His^<166>,Arg^<167>,Glu^<173>,Asp^<263>をAlaに置換した変異リセプターのリガンド結合能を検討した結果、Arg^<167>,Asp^<263>はリガンド結合に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。
情報伝達機構の検討では、第2細胞内ループとC端側テ-ルの8種類の変異リセプターDNAをCHO-K1細胞に導入してstable expressionの系を確立した。この系を用いてAII刺激に対するGTP効果、イノシートール三燐酸産生能を検討した。その結果、第2細胞内ループN-端側のAsp^<125>,Arg^<126>,Tyr^<127>、C端側テ-ルのTyr^<312>,Phe^<313>,Leu^<314>が細胞内情報伝達に重要であることが明らかとなった。
以上の結果は、AT_1のみならず細胞膜7回貫通型、G蛋白共約リセプターフェミリ-に属する多くのリセプターの機能を知るうえで重要な知見を与えると考えている。
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[Publications] Y Yamano: "Mutagenesis and the molecular modeling of the rat angiotensin II recepter(AT1)" Journal of Biological Chemistry. 270. 14024-14030 (1995)
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[Publications] K Ohyama: "Disulfide bridges in extracellular domains of angiotensin II rece ptor type LA" Regulatory Prptides. 57. 141-147 (1995)
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[Publications] S Chaki: "Role of carboxyl tail of the rat angiotensinn II type I receptor in agonist induced nternalization of the receptor" Kidney International. 46. 1492-1495 (1994)
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[Publications] T Inagami: "Cloning, expression and regulation of angiotensin II receptors" European Heart Journal. 15. 104-107 (1994)
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[Publications] K Ohyama: "Domains for G-protein coupling in angiotensin II receptor type I: Studies by site-directed mutagenesis" Biochem Biophys Res Comm. 189. 677-683 (1992)
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[Publications] Y Yamano: "Identification ob amino acid residues of rat angiotensin II receptor for ligand bindign by site-directed mutagenesis" Biochem Biophys Res Comm. 187. 1426-1431 (1992)
