1995 Fiscal Year Annual Research Report
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06454511
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
永井 教之 岡山大学, 歯学部, 教授 (90085770)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河原 研二 岡山大学, 歯学部, 助教授 (50076113)
赤木 巧 岡山大学, 歯学部, 教務員 (50192878)
村田 勝 岡山大学, 歯学部, 助手 (00260662)
井上 正久 岡山大学, 歯学部, 助手 (20223274)
長塚 仁 岡山大学, 歯学部, 助教授 (70237535)
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| Keywords | 歯原性腫瘍 / Amelogenin / Ameloblastoma / 腺様歯原性腫瘍 / mRNA / ジゴキシゲニン標識 / エナメル芽細胞 / 高円柱細胞 |
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| Research Abstract |
歯原性腫瘍の分類は,腫瘍細胞の分化の程度に関連させてなされているが,その指標の一つとして,Amelogeninの局在とその遺伝子発現との相関の研究がある。今回,Amelogenin蛋白および,そのmRNA probeを作製しその発現を観察した。
材料と方法: Wistar系胎生20日ラットを用いた。4%パラホルムアルデヒド溶液で灌流固定,切片を作製した。probe作製:ヒトAmeloblastoma plexiform typeからtotal RNAを抽出し,primers (sense :5′-TCGGTCCTGCCT CATCACCATCC-3′,anti sense ; 5′-CCGCTTGGTCTT GTCTGTTG-3)と共にPCR法にて増幅した後,Vector (Bluescript)組み込み,Dig RNA Labelingkit (Boehringer Mannheim)を用いin vitro transcriptionを行い,Digoxigenin標識single strand RNA probeを作製した。50℃,16時間hybridize後,Dig Nucleic Acid Detection Kit (Boehringer Mannheim)により,抗原抗体反応を行い,光顕的に観察した。歯原性腫瘍のAmelogenin蛋白の検索にはpolyclonal抗体を用いた。
結果と考察:ラット,マウス切歯のエナメル芽細胞にAmelogenin蛋白とAmelogenin mRNAのシグナルを認めた。未分化のエナメル上皮細胞には,シグナルの発現は認めなかった。Ameloblastomaのごく一部の症例にAmelogenin蛋白の局在を認めた。又,Amelogenin mRNAのシグナルはしばしば胞巣の中心部細胞と周辺の高円柱細胞の基底膜側に認めた。以上のことから多くのAmeloblastomaに於てAmelogeninの遺伝子発現がかなりの頻度で生じていることが示唆された。
腺様歯原性腫瘍(AOT)では腫瘍細胞全体にRNAのシグナルを認め,Amelogenin蛋白の局在を認めたことから,分化度の高い腫瘍を分子生物学的レベルで確認した。
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[Publications] 林 勝彦: "エナメス上皮腫,悪性エナメル上皮腫の増殖細胞核抗原(PCNA)による免疫組織化学的検討" 日本口腔科学会誌. 44. 7-13 (1995)
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[Publications] Noriyuki Nagai: "Gene Expression of Bone Matrix Protein mRNA during BMP Induced chondrogenesis and Osteogenesis by in situ Hybridization" Journal of Hard Tissue Biology. 4. 15-23 (1995)
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[Publications] 林 勝彦: "エナメス上皮腫における細胞増殖能と癌遺伝子産物,癌抑制遺伝子産物発現の相関" 岡山歯学会誌. 14. 15-26 (1995)
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[Publications] 米本 嘉憲: "口腔扁平上皮癌における癌抑制遺伝子産物と増殖細胞核抗原(PCNA)の免疫組織化学的検討" 日本口腔外科学会誌. 41. 746-750 (1995)
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[Publications] 井上 正久: "歯原性腫瘍のエナメル基質蛋白,IVコラーゲン,ファイブロネクチン局在の免疫組織化学的研究" Journal of Hard Tissue Biology. 4. 9-14 (1995)
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[Publications] Hitoshi Nagatsuka: "Immunohistochemical study of Cytokeratin Patterns in Follicular and Plexiform Ameloblastoma" Journal of Hard Tissue Biology. 4. 50-56 (1995)
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[Publications] Y.Kuboki: "Two Distinctive BMP-Carriers Induce Zonal Chondrogenesis and Membranous Ossification,Respectively ; Geometrical Factors of Matrices for Cell-Differentiation" Connective Tissue Research. 32. 219-226 (1995)
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[Publications] 今村高行: "骨誘導蛋白(rhBMP-2)による異所性骨形成と骨基質蛋白遺伝子の発現-In situハイブリダイゼーション法による検討-" 岡山歯学会誌. 14. 1-3 (1995)
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[Publications] Hong-In Shin: "The Effect of Engymatic Treatment on Immunohistochemical Staining of Collagen in Mandibular Condyle of Rats" Journal of Hard Tissue Biology. 4. 8-14 (1995)
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[Publications] 永井教之: "アパタイト-骨結合界面の初期石灰化とBMPによる異所性骨誘導" Journal of Hard Tissue Biology. 4. 79-90 (1995)
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[Publications] Masaru Murata: "Histopathological Studies of Heterotopic Bone Formations Induced by BMP Carrier Composites" Journal of Hard Tissue Biology. 3. 67-72 (1994)
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[Publications] Toshiro Sakae: "Crystallographic properties and cell Afinity study of Synthetic α-Tricalcium phosphate ; Tricalcium Phosphate,Tetranalium" Journal of Hard Tissue Biology. 3. 73-78 (1994)
