インヌ-フェロンの肝炎治療効果を抑制する生体内因子、ウイルス側因子の研究

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06454615
• Research Institution: 国立予防衛生研究所
• Principal Investigator: 小長谷 昌功 国立予防衛生研究所, ウイルス製剤部, 室長 (70153583)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 斉藤 早久良 国立予防衛生研究所, ウイルス製剤部, 主任研究員 (90175349) ; 松浦 善治 国立予防衛生研究所, ウイルス第二部, 室長 (50157252)
• Keywords: IFN / HCV / cytokine / IFN inhibitor

Research Abstract

C型肝炎ウイルス(HCV)のウイルス性蛋白のあるものがIFN感受性を抑制する細胞内物質としてはたらく可能性を調べるために以下の実験を行った。まずウイルスDNAを含む発現ベクターをHePG2細胞にトランスフェクトし、ウイルス蛋白の発現細胞を樹立し、IFNα、β、γに対する感受性を比較した。まずHCVの構造蛋白であるC,E,E_2が発現しているHePG2-325細胞が樹立され、この細胞のIFN感受性をベクター移入のコントロール細胞(HePG2 SWX)と比較したが、両細胞間に差は認められなかった。更に、構造蛋白ではないProtease/NTPaseを含むNS-3,NS4,NS5aの一部の蛋白を発現するHepG2-3269においてもIFNの感受性を調べたがHepG2SWXと差は認められなかった。その後さらにHCVの全ゲノムを入れ発現させたHepG2細胞が得られたが同様に影響がみられなかった。さらにHCV DNAを組み込んだアデノウイルスベクター系を用いて異なった細胞、例えば組換えアデノウイルスを感染させた2倍体細胞であるFS細胞におけるIFN感受性を比較したが、現在までの結果ではIFN感受性を抑制するウイルス蛋白の存在を実証できる実験結果は得られなかった。一方、ヒト包皮2倍体線維芽細胞(FS細胞)においてはIL-1,EGF,PDGFがIFNの産生及び作用を抑制する事を小長谷は報告している。平成6年度においては、ヒト羊膜由来FL細胞、ヒト肝癌由来HePG2細胞、PLC細胞におけるIFN感受性に及ぼす各種サイトカインの影響を調べた。しかしIFNの作用に影響を及ぼすサイトカインは細胞によって著しく異なり、肝臓由来ガン細胞と言えども肝細胞のIFN感受性をみるモデルに必ずしもなり得ない事が明らかになった。よってサルの初代肝細胞の培養技術を確立し、IFN作用に対するサイトカインの影響をみるとIL-1,EGFがIFNの作用を抑制した。現在は確認実験および他のサイトカインの影響を調べている。