1994 Fiscal Year Annual Research Report
血小板凝集の調節作用を持つ生理活性タンパク質の構造-機能相関
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06454646
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Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
千谷 晃一 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 教授 (60179942)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤村 吉博 奈良医科大学, 医学部・附属病院, 助教授 (80118033)
松井 太衛 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (90183946)
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| Keywords | 血小板凝集 / フォンビルブラント因子 / ボトロセチン / ボトロンビン / フィブリノーゲン / コラーゲン / 高分子量出血性メタロプロテアーゼ / ジスインテグリン |
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| Research Abstract |
ボトロンビンの精製と構造および機能:Bothrops jararacaの蛇毒からトロンビン様活性を待つボトロンビンを精製し、232アミノ酸残基の全一次構造を決定した。ボトロンビンはフィブリノーゲンに作用してフィブリンを形成するが、その際フィブリノペプチドAのみを遊離する。凝固第VIII因子を活性化する活性は弱く、またDFPによって阻害されるがヒルジンによる阻害は認められなかった。単独では血小板に作用しないが、フィブリノーゲン添加後の血小板を凝集するという特異な性質を示した(Biochemistry(1994)33,1843-1849)。
フォンビルブラント因子(vWF)の生理的活性化分子の探索:in v itroでvWFを活性化する蛇毒ボトロセチンに対するモノクロナール抗体を作製した。その中で、一種(BCT-4-3)がヒト血管内皮細胞に反応性を示し、その反応はフィブロネクチンにより増加した。臍帯抽出液より、BCT-4-3固定化カラムを用い、ボトロセチン凝似分子を性製したところ、フィブロネクチンと45kDa分子が抽出され、これらの複合体が生理的vWF活性化分子ではないかと推察した(J.Biochem.(1995)印刷中)。
ジャララギンC末端ドメインの精製と構造:Bothrops jararacaの蛇毒からコラーゲン惹起血小板凝集を阻害するタンパク質因子を精製し、212アミノ酸残基からなる全一次構造を決定したところ、既知の高分子出血性メタロプロテアーゼ″ジャララギン″のジスインテグリン様ドメインを含むC末端部位(残基210-421)に一致した。ただしこのドメインではRGD配列に相当する部位はECDに置換していた(Biochem.Biophys.Res.Commun.(1994)201,331-339)。
血小板GPIb結合タンパク質の精製と性質:Bothrops jararacaなどの蛇毒からGPIbと特異的に結合し、リストセチン又はボトロセチン活性化vWFとGPIbの結合を阻害するタンパク質因子を精製し、そのN末端アミノ酸配列を決定したところ、いずれも作用の全く異なるボトロセチン(vWF結合タンパク質)と高度の相同性を示した(Thromb.Haemost.(1995),Biochem.J.(1995)およびBiochim.Biophys.Acta(1995)印刷中)。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] Nishida,S.et al.: "Purification and Characterization of Bothrombin,a Fibrinogen-Clotting Serine Protease from the Venom of Bothrops jararaca." Biochemistry. 33. 1843-1849 (1994)
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[Publications] Usami,Y.et al.: "A 28kDa-protein with Disintegrin-like Structure(Jararhagin-C)Purified from Bothrops jararaca Venom Inhibits Collagen-and ADP-induced Platelet Aqqregation." Biochem.Biophys.Res.Commun.201. 331-339 (1994)
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[Publications] Miura,S.et al.: "Strutural Elements Intluencing von Willebrand Factor(vWF)Binding Affinity for Platelet Glycoprotein Ib within a Dispase-digested vWF Fragment." Blood. 84. 1553-1558 (1994)
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[Publications] Katayama,M.et al.: "Fibronectin and 130-kDa Molecule Complex Mimics Snake Venom Botrocetin-like Structure Potentially Modulating Association between von Willebrand Factor and Vascular Vessel Wall." J.Biochem.(in press). (1995)
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[Publications] Fujimura,Y.et al.: "Isolation and Characterization of Bothrops jararaca GPIb-BP,a Snake Venom Antagonist Specific to Platelet Glycoprotein Ib." Thromb.Haemostas.(in press). (1995)
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[Publications] Kawasaki,T.et al.: "Tokaracetin,a New Platelet Antigonist That Binds to Platelet Glycoprotein Ib and Inhibits von Willebrand Factor-dependent Shear-induced Platelet Aggregation." Biochem.J.(in press). (1995)
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[Publications] Fujimura,Y.and Titani,K.: "Haemostasis and Thrombosis,Third Edition Volume 1(Bloom,A.L.,Forbes,C.D.,Thomas,D.P.,and Tuddenham,E.G.D.Ed.)" Churchill Livingstone,Edinburgh,717 (1994)
