1995 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子組換えによる神経ペプチド前駆体の発現とプロセシング酵素の検索
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06454701
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| Research Institution | YOKOHAMA CITY UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
加藤 武 横浜市立大学, 大学院・総合理学研究科, 教授 (80064856)
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| Keywords | コレシストキニン / タキキニン / 前駆体 / プロセシング酵素 / 蛍光基質 / 遺伝子組換え |
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| Research Abstract |
脳内神経伝達物質あるいは調節因子の内,神経ペプチドは脳内に多く存在する。しかし,それらの生合成酵素に関する研究が遅れており,生理機能・調節機構の解明がほとんど行われていない.2年目の本年は神経ペプチドのうち大脳皮質に多く存在し,記憶に関するコレシストキニン,サブスタンスPおよびタキキニン類の生合成酵素の単離に関する研究を行った.神経ペプチド前駆体構造と類似した蛍光基質を3種類合成し,ブタ下垂体後葉から酵素の単離を試みた.また,これら神経ペプチドの前駆体蛋白質を大量に発現させるため,コレシストキニンとタキキニン前駆体遺伝子を組換えし,baculovirusと大腸菌から前駆体蛋白質の発現を行った.タキキニン蛋白質は融合蛋白質として合成できた.その結果,不溶性蛋白質として発現し,可溶化に成功した.現在ブタ下垂体から精製中の酵素との関係を検討している.ブタ下垂体には少なくとも,合成基質に対する活性ピークが3種類見つかっている.ゲルろ過から分子サイズは約100,80,60kDaであった.これらの酵素がコレシストキニンとタタキニンの前駆体蛋白質を水解するか否かを検討している.
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[Publications] Yajima,R,Chikuma,T,Kato,T: "High-performance liquid chromatography-fluorimetric assay method for carboxy peptidase H activity" J.chromatography B. 667. 333-338 (1995)
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[Publications] Liu,J,K,Matsushima,N. Yamaguchi,t. Kato,T.: "Chronic trertment of indeloxazine a cerebral activator,induced an increase of acetylcholine level in rat frontal cortex studied with" Biogenic Amines. 11. 39-48 (1995)
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[Publications] Takasugi,H.,Mori,M.,chikuma,T.,Kato,T.: "Distribution and processing of peptidylglycine α-amicoting monooxygenase activity in rat dorsal root genglia and sciatic nerves" Neurochemistry International. (in press).
