1996 Fiscal Year Annual Research Report
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06556058
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
小川 智也 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (30087572)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松浦 義治 予防衛生研究所, ウィルス第2部, 室長 (50157252)
川口 博 電気化学工業(株), 総合研究所, 研究員
相川 順一 理化学研究所, 細胞制御化学研究室, 研究員 (10260192)
塩田 邦郎 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (80196352)
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| Keywords | 機能性糖タンパク質 / 天然型糖鎖 / バキュロウィルス / PL-Im / eCG / hCG / 組換え糖タンパク質 / 哺乳類株化培養細胞 |
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| Research Abstract |
生体内のタンパク質ホルモン、細胞成長因子、サイトカインやこれらの受容体のほとんどは糖タンパク質である。糖鎖はこれらの生理活性タンパク質の立体構造の維持やタンパク質分解酵素による分解を妨げるなどの役割を果たしているのみならず、糖鎖構造そのものが情報として機能していることが明らかになってきている。また、糖鎖は抗原性にも関係していることも知られ、機能性糖タンパク質の生産を目的とした天然型糖鎖を有する糖タンパク質の生産システムの開発が強く望まれている。本研究の目的は、遺伝子工学的手法と有機化学合成法を利用して天然型糖タンパク質の生産システムを開発することである。
本年度は遺伝子工学的手法により、糖タンパク質(胎盤性ラクトジェrPL、絨毛性性腺刺激ホルモンeCG、卵胞刺激ホルモンFSHおよび白血病阻止因子LIF)の、糖鎖付加部位に変異を導入した糖鎖欠損タンパク質を作成し、糖鎖構造の解析と活性の測定をおこなった。また、これら遺伝子組換えタンパクの糖鎖末端の修飾に関する予備的な検討を加えた。その結果、LIFには6箇所N型糖鎖が付加され、付加部位により生物活性の促進と抑制に関わっていること、FSH作用と黄体形成(LH)活性の両方を有するeCGはそのαサブユニットに付加されている糖鎖がこれらの作用の分子スイッチとして機能している可能性が示された。そして、高マンノース型糖鎖が付加されたFSHの大量生産を行い、活性を有していることを確かめた。さらに、活性糖タンパク質の末端糖ペプチドの部分有機合成実験も行い、活性型糖タンパク質の生産法を確立した。
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[Publications] Yuko Nakahara,et al.: "Rationally designed synthesis of high-mannose and complex type undecasaccharides." Carbohydr.Res.280. 67-84 (1996)
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[Publications] Hiroki Shimizu,et al.: "4,5-Dichlorophthaloyl group for amino protection in carbohydrate chemistry" Biosci.Biotech.Biochem.60. 73-76 (1996)
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[Publications] Yoshiaki Nakahara et al.: "Synthetic studies on cell-surface glycans:An approach to O-linked sialoglycoprotein." Modern Methods in Carbohydrate Synthesis. 301-314 (1996)
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[Publications] Akihito Dan et al.: "An efficient synthetic route to bisecting N-acetylglucosamine containing asparagine-linked glycan" Carbohydr.Lett.,. 1. 469-474 (1996)
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[Publications] Kunio Shiota et al.: "Differerntial role of oligosaccharides in equine chorionic gonadotropin(eCG)/luteinizing hormone(LH)to express follicle stimulating hormone(FSH)-like and LH-like activities." J.Reprod.Develop.43(in press).
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[Publications] K.Min,et al.: "Site-directed mutagenesis of recombinant equine chorionic gonadotropin/luteinizing hormone:Differential role of oligosaccharides." Endocrine J. 43. 585-593 (1996)
