1995 Fiscal Year Annual Research Report
新合成TEMPO標識ビオチンによるスピンアッセイ法の確立
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06557016
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| Research Institution | 福井医科大学 |
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Principal Investigator |
福田 優 福井医科大学, 医学部, 教授 (60079720)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐々本 一美 株式会社同仁化学研究所, 研究部, 研究部長
河野 雅弘 日本電子株式会社, 分析機器本部, 研究室長
法木 左近 福井医科大学, 医学部・附属病院, 助手 (30228374)
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| Keywords | ESR / ビオチン / TEMPO / アビジン / スピンアッセイ / ビオチン・TEMPO |
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| Research Abstract |
平成6年度及び7年度において、TEMPO標識ビオチン(biotin-TEMPO)の合成・精製の方法を確立した。すなわち、biotin/dry dimethylformamide懸濁液を-10℃に冷却し、triethylamine(TEA)とisobutylchloroformateを加え、攪拌し、これにTEAとamino-TEMPOを加え、室温にもどし攪拌する。反応液を濾過.減圧濃縮したのち、chloroformに溶かし、洗浄・乾燥の後、再度減圧濃縮する。粗製はカラムクロマトグラフで精製し、目的のbiotin-TEMPOを得た。次に、biotin-TEMPOによる生体内アビジン定量の基礎的研究として、同時再現性(n=5)を検討し、CV値は4.1%と高い再現性を得た。IFCC勧告法により求めた検出限界は、0.012mg/mlであった。0.000-0.100mg/mlの範囲で得られた検量線は直線性を示し、その相関係数はγ=0.995であった。干渉物質による影響を調べたが、遊離型ビリルビン・抱合型ビリルビン・溶血ヘモグロビン・乳びに関してその影響は認められなかった。これらの結果は、第17回磁気共鳴医学会(伊勢原市)及び第42回日本臨床病理学会総会(宇都宮市)において発表した。健常者(n=4)の血清中アビジン値の測定を行ったところ、0.037±0.004mg/mlであった。しかし、炎症性疾患を疑う症例16例について検討したところ、明らかな有意差は認められなかった。さらに、biotin-TEMPOを用いた研究として、avidin-biotinの解離条件の検討があげられる。avdinと解離するとbiotin-TEMPOのシグナルが回復するので定量的な検討も可能であった。この結果の一部は、第36回日本組織細胞化学総会(札幌市)にて発表した。これらの研究を通して、新たに、TEMPO標識ビオシチン(biocytin-TEMPO)を合成・精製した。これにより、理論的には、新しいビオチニダーゼ活性の測定が可能と思われる。
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