1995 Fiscal Year Annual Research Report

DNAプローブとPCR法によるBacteroides fragilis迅速診断法

Research Project

Project/Area Number	06557020
Research Institution	University of Tokushima
Principal Investigator	大西克成徳島大学, 医学部, 教授 (10037400)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	鴨頭峻大塚製薬(株), 新薬開発部, 主任研究員秋元茂徳島大学, 医学部, 助教授 (10159337)
Keywords	Bacteroides fragilis / DNAプローブ / PCR / 迅速診断法 / ノイラミニダーゼ / DNA診断 / 感染症 / rRNAスペーサー領域
Research Abstract	Bacteroides fragilis YCH46株とTAL2480株のノイラミニダーゼ構造遺伝子nanHから、これら2株間で保存されている塩基配列を選択し、4種類のPCRプライマーとオリゴヌクレオチドプローブPH1を作製した。これらのPCRプライマーを用いて、nested PCRを行った結果、その検出限界は10CFUのB.fragilisと10fgのchromosomal DNAであった。59株のB.fragilisとB.fragilis以外の45菌種45株を用いた特異性の検定では、firstプライマーセットを用いた場合、B.vulgatusに偽陽性バンドを認めたのみであった。このような偽陽性を除外するため、3′末端ジゴキシゲニン標識オリゴヌクレオチドプローブPH1を用いて、それぞれのPCR増幅産物に対してdot blot hybridizationを行った。この結果、B.fragilisのPCR増幅産物では全て陽性スポットを検出したが、B.fragilis以外の45菌種45株では全て陰性であり、first PCRで偽陽性を示したB.vulgatusを除外することができた。また、B.fragilisによる菌血症モデルマウスを作成し、その血液検体を用いてPCR-dot blot hybridizationを行った。その結果、血液検体中に存在する20CFUのB.fragilisを検出することができ、nanH遺伝子を用いたPCR-dot blot hybridization法は臨床応用可能なB.fragilisの迅速診断法であると考えられた。また、B.fragilisの新たな病原因子としてfibrinogenのα鎖を特異的に分解するプロテアーゼの精製に成功した。さらに、B.fragilisのロイシン合成遺伝子leuBの塩基配列の決定、Bacteroides属における16S-23S rRNAスペーサー領域の解析を行い、新たなB.fragilisの迅速診断法開発への可能性を示した。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Ono,T.: "Cloning and expression of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase gene in Escherichia coli and Bacteroides uniformis." FEMS Microbiology Letters. 121. 153-158 (1994)
[Publications] Akimoto,S.: "Complete sequence of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase-encoding gene." Biochemical and Biophysical Research Communications. 203. 914-921 (1994)
[Publications] Sarker,M.R.: "Molecular cloning of the leuB gene from Bacteroides fragilis by functional complementation in Escherichia coli." Microbiology and Immunology. 39. 19-25 (1995)
[Publications] Sarker,M.R.: "Nucleotide sequence of the gene encoding β-isopropylmalate dehydrogenase (1euB) from Bacteroides fragilis." Microbiology and Immunology. 39. 525-529 (1995)
[Publications] Yong Chen.: "Purification and characterization of a Fibrinogen-degrading protease in Bacteroides fragilis strain YCH46." Microbiology and Immunology. 39. 967-977 (1995)
[Publications] Kuwahara,T.: "Detection of Bacteroides fragilis by PCR assay targeting the neuraminidase-encoding gene." Letters in Applied Microbiology. (in press).
[Publications] 秋元茂、大西克成: "エッセンシャル微生物学" 医歯薬出版株式会社, 4 (1995)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

DNAプローブとPCR法によるBacteroides fragilis迅速診断法

Principal Investigator

大西 克成 徳島大学, 医学部, 教授 (10037400)

Research Products

[Publications] Ono,T.: "Cloning and expression of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase gene in Escherichia coli and Bacteroides uniformis." FEMS Microbiology Letters. 121. 153-158 (1994)

[Publications] Akimoto,S.: "Complete sequence of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase-encoding gene." Biochemical and Biophysical Research Communications. 203. 914-921 (1994)

[Publications] Sarker,M.R.: "Molecular cloning of the leuB gene from Bacteroides fragilis by functional complementation in Escherichia coli." Microbiology and Immunology. 39. 19-25 (1995)

[Publications] Sarker,M.R.: "Nucleotide sequence of the gene encoding β-isopropylmalate dehydrogenase (1euB) from Bacteroides fragilis." Microbiology and Immunology. 39. 525-529 (1995)

[Publications] Yong Chen.: "Purification and characterization of a Fibrinogen-degrading protease in Bacteroides fragilis strain YCH46." Microbiology and Immunology. 39. 967-977 (1995)

[Publications] Kuwahara,T.: "Detection of Bacteroides fragilis by PCR assay targeting the neuraminidase-encoding gene." Letters in Applied Microbiology. (in press).

[Publications] 秋元 茂、大西克成: "エッセンシャル微生物学" 医歯薬出版株式会社, 4 (1995)

大西克成徳島大学, 医学部, 教授 (10037400)

[Publications] 秋元茂、大西克成: "エッセンシャル微生物学" 医歯薬出版株式会社, 4 (1995)