歯科材料の生物学的評価のための動物実験代替法の開発

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06557106
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 佐藤 温重 東京医科歯科大学, 歯学部, 教授 (40045985)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 佐藤 和子 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (50046083) ; 日景 盛 北海道医療大学, 歯学部, 助教授 (20134710) ; 鎌滝 哲也 北海道大学, 薬学部, 教授 (00009177) ; 下河辺 宏功 北海道大学, 歯学部, 教授 (20014011) ; 長尾 正憲 東京医科歯科大学, 歯学部, 教授 (60014213)
• Keywords: 顎骨骨芽細胞 / ヒト好中球 / 口腔粘膜モデル / 薬物代謝酵素遺伝子 / 活性酵素 / 動物実験代替 / ヒト歯髄細胞 / プロスタグランジンE_2

Research Abstract

動物実験代替法として応用可能な口腔組織の臓器モデルの開発と生物学的評価の高度化となる生体適合性評価指標について研究を実施した。研究班会議を2回開催し、研究計画の立案と成果の評価を行った。I.臓器モデルの開発 1)顎骨骨芽細胞系:マウス顎骨より骨芽細胞の分画を分離し培養した。得られた4つの細胞系の中からアルカリ性ホスファターゼ活性の高い細胞系について骨芽細胞の分化機能の維持を調べ、石灰化基質を形成し、I型コラーゲン等のmRNAを発現し、活性型ビタミンD_3、エストロジェンに応答性を有する細胞系11-4tc細胞を得た。2)口腔上皮細胞系:正常男子口腔粘膜片より角化細胞と線維芽細胞を分離し培養した。結合組織細胞をコラーゲンゲル内培養により結合組織モデルを作成し、その上面に角化細胞を播種し、10日間培養することによって口腔粘膜モデルを作成した。組織学的に正常粘膜に類似した構造を有する粘膜モデルが得られた。3)ヒト薬物代謝酵素遺伝子導入細胞系:CHL細胞にヒト薬物代謝酵素P4501A2及びN-Acetytransferase cDNAを導入した細胞系を作成した。本細胞は前発癌物質を代謝活性する能力を有していた。
II.生体適合性指標の開発 1)ヒト好中球のO_2^-、PGE_2産生:好中球のO_2^-およびPGE_2産生を細胞機能指標としてボンディング材の毒性を調べ、ボンディング材は好中球の生存に影響しないが、O_2^-およびPGE_2産生を抑制することを明らかにした。2)薬物代謝酵素遺伝子導入細胞系による細胞毒性試験:遺伝子導入により薬物代謝能を付与された細胞に対する歯科用モノマーの毒性を調べ、MMAは遺伝子導入細胞で毒性が低下していた。以上により、本年度の研究目標を達成した。

Research Products

• [Publications] 藤江克俊: "ボンディング材がヒト白血球の細胞機能に与える影響" 日本歯科保存学雑誌. 37(4). 1279-1293 (1993)
• [Publications] Yanagawa,Y.et al.: "Stable expression of human CYP1A2 and N-AcetyltransferaseS in Chinese hamster CHL cells:Mutagenic activation of 2-amino-3-methylimidazo〔4,5-f〕quinoline and 2-amino-3,8-dimethylimidazo〔4,5-f〕quinoxaline" CANCER RESEARCH. 54. 3422-3427 (1994)
• [Publications] 吉田敦志 他: "顎骨由来の骨芽細胞の老化モデルの作成" 日本硬組織研究技術学会雑誌. 3(1). 46-47 (1994)
• [Publications] 吉田敦志他: "顎骨の老化に関する実験的研究" 日本歯科補綴歯科学会雑誌. 38(91特別号). 147 (1994)