腎症候性出血熱ウイルス感染の血清診断法と検査システムの確立に関する研究

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06558112
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 有川 二郎 北海道大学, 医学部, 教授 (10142704)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高倉 彰 (財)実験動物中央研究所, 微生物モニタリングセンター, 室長代理 (60167484) ; 杉山 和良 国立予防衛生研究所, ウイルス一部, 室長 (90150185) ; 吉松 組子 北海道大学, 医学部, 助手 (90220722) ; 苅和 宏明 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 講師 (70224714)
• Keywords: 腎症候性出血熱 / ハンタウイルス / バキュロウイルス / 血清診断 / ELISA / Western blotting / 実験動物 / 人獣共通感染症

Research Abstract

これまでの研究で、大腸菌発現組み換え核蛋白を抗原とするcapture-ELISAがバキュロウイルス発現蛋白を抗原とする場合よりもはるかに非特異反応が軽減することが判明し、この抗原を用いた解析を継続している。本年度では以下の知見が得られた。
1.大腸菌発現組み換え核蛋白を抗原としてcapture-ELISAへ応用する場合の実験諸条件を検討し、至適抗原固相化時間ならびに抗原濃度を決定した。
2.抗体検出感度を検討するため、実験感染ラットの経過血清を用い、40倍希釈血清における本ELISAの抗体検出感度を間接蛍光抗体法(IFA)と比較した。その結果、ELISAでは感染後7日目(吸光度1.356)から抗体が検出出来、以後、実験終了時の28日目(吸光度2.187)まで検出された。この結果はIFAと一致した。
3.抗体検出における特異性を検討するため非汚染施設由来ラット血清110検体の40倍希釈血清における組み換え抗原と抗原を発現していない大腸菌をコントロール抗原として反応性を検討した。その平均吸光値は組み換え抗原に対しては0.060±0.036、コントロール抗原に対する吸光値(0.056±0.039)とほぼ同程度の低い値を示した。また、IFAで判定が困難であったが中和試験およびウエスタンブロッティング法により陰性と判定されたラット血清25例においてELISAを実施したがいずれも陰性範囲の吸光度しか示さなかった。
4.以上の成績により本ELISAはIFAに比べ安全で同等の検出感度と特異性を有することが示され実験用ラット等を対象とする標準スクリーニングにも応用可能であると考えられた。今後、本法のキット化のための基礎的条件の決定が必要である。

Research Products

• [Publications] Yoshimatsu, K.: "Production of recombinant hantavirus nucleocapsid protein expressed in silkworm larvae and its use as a diagnostic antigen in detecting antibodies in serum from infected rats" Laboratory Animal Science. 45. 647-651 (1995)
• [Publications] Kariwa, H.: "Evidence for the existence of Puumala-related virus Clethrionomys rufocanus in Hokkido, Japan" American Journal of Tropical Medicine and Hygene. 53. 222-227 (1995)
• [Publications] Kariwa, H.: "Characterization of the mode of Hantaan virus infection in adults mice using a nested reverse transcriptase polymerase chain reaction : transient virus replication in adult mice" Microbiology and Immunology. 39. 35-41 (1995)
• [Publications] Yoo, YC.: "Effect of MDP-Lys (L18), a derivatives of MDP, on enhancing host resistance against Hantaan virus infection in newborn mice." Vaccine. 13. 1300-1305 (1995)
• [Publications] Yoshimatsu, K.: "Western blotting using recombinant Hantaan virus nucleocapsid protein expressed in silkworm as a serological confirmation of hantavirus infection in human sera." Journal of Veterinary Medical Science. 58. 71-74 (1996)
• [Publications] Yoshimatsu, K.: "Characterization of the nucleoapsid protein of Hantaan virus strain 76-118 using monoclonal antibodies" Journal of General Virology. 77. 695-704 (1996)
• [Publications] Kariwa, H.: "Modes of Seoul virus infections : persistency in newborn rats and transiency in adult rats." Archives of Virology. 141. 2327-2338 (1996)