サルのエイズ動物モデルを用いたエイズペプチドワクチンの開発に関する研究

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06558113
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 山本 博 富山医科薬科大学, 動物実験センター, 助教授 (00108797)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 井戸 栄治 京都大学, ウイルス研究所, 助手 (70183176) ; 村口 篤 富山医科薬科大学, 医学部, 教授 (20174287) ; 吉川 泰弘 筑波医学実験霊長類センター, 所長 (80109975)
• Keywords: アカゲザル / MHC class I / 合成ペプタイド / サル免疫不全ウイルス(SIV) / 中和抗体 / CTL

Research Abstract

1)アカゲザルの選定
MHC class I スクリーニング
(1)奄美大島で飼育されているアカゲザル約50頭および日本SLC(伊豆)の所有するアカゲザル38頭を調べた。
(2)血液より末梢血リンパ球(PBMC)を分離し,H.papioを用いてBリンパ球をトランスフォームしてB lymphoidblast cell line(BLCL)を作製した。
(3)作製したBLCLを^<35>Sでラベルして,ID-IEFによりMHC class I について解析を加えた。
実験に適するアカゲザルのスクリーニングとしてBウイルス,サル水痘ウイルス抗体の検査を行った。以上の検査より,コントロール実験および混合peptide抗原接種のために,Bウイルスおよびサル水痘ウイルスフリーのアカゲザル5頭を購入した。
2)ペプタイド合成
抗原用として(1)計画時点より新たに発見されたCTLエピトープに対するpeptideを追加すること,(2)諸外国で本年度に発表された実験結果を参考に数種の異なるpeptideを合成した。
合成peptide
次のpeptideを準備した。(1)P11(SIV mac gag),(2)P3A(SIV mac gag),(3)P3B(SIV mac gag),(4)P18(SIV mac gag)
3)ペプチドワクチンによる抗SIV免疫の効果判定のための技術としてin vivoにおけるSIV検出法の確立を行った。
(1)PCRによる血中リンパ球中のSIVプロウイルスの測定法
(2)quantitative competitiveRT-PCRによる血中ウイルス量の測定法
(3)In Situ Hybridizationによる組織中,特にリンパ節内のウイルスの同定法
(4)Immunohistochemistryによる組織中のウイルス感染細胞の同定法
また,SIV感染成立によるウイルスに対する液性免疫の測定法として精製SIV virionを用いたELIZA法を確立した。
以上の事より私達は,peptideは単独でなく混合して使用すること,また,peptideと組換えSIVの組合わせたもの,nefを欠如したSIVなどをワクチンの候補として試み,感染防御効果を調べる計画である。5頭のサルに準備出来次第免疫する予定である。