夏型ホルモン活性物質の精製単離とその一次構造の部分的決定

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06640881
• Research Institution: YAMAGUCHI UNIVERSITY
• Principal Investigator: 遠藤 克彦 山口大学, 理学部, 教授 (70089845)
• Keywords: NEUROPETIDE / SHLKMOTH / SUMMER-MORPH / BOTTERFLY / POLYGONIA / ISOLATION / STRUCTURE / BPMBYXIN

Research Abstract

本年度は、農家から大量のカイコガの蛹(約12万頭)を購入し、羽化した成虫から解剖によって脳-食道下神経節複合体を集めた。集めた脳-食道下神経節複合体から、従来の方法によって夏型ホルモン活性物質の粗抽出液を作製し、精製を試みた。精製はSephadex G-50カラムによるゲル濾過、陰イオン交換クロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー等の方法によって行った。特に精製の各過程では、カイコガ成虫の脳内に共存し、夏型ホルモン活性物質とその物理化学的性質が非常に良く似ているbombyxinが夏型ホルモン活性物質と分離されているかどうかを調べた。精製の各段階で得られた夏型ホルモン活性分画の前胸腺刺激ホルモン活性を、カイコガ4令幼虫の培養前胸腺を用いた方法によって定量した。その結果、夏型ホルモン活性物質が陰イオン交換体に吸着されるのに対して、bombyxinが陽イオン交換体に吸着されることを見い出した。その後、夏型ホルモン活性物質の粗精製分画を陰イオン交換クロマトグラフイ-にかけるよって、夏型ホルモン活性物質とbombyxinを分離することに成功した。また、今回の研究で得られた最終分画をSDS-PAGEにかけ、銀染法で染色したところ、そのレーンには一本のペプチドノ染色バンドが認められ、そのペプチドの分子量は夏型ホルモン活性物質と同じ4-5kDであると推定された。しかし、今回の精製では、活性物質のイオン交換クロマトグラフィーと、逸れに続く脱塩操作の際の回収率が低いために、その一次構造を部分的に決定するために必要な量の標品を得るには至らなかった。

Research Products

• [Publications] 升島裕子・河村信子・遠藤克彦: "山口県中東部(山口盆地およびその周辺)における蛾の調査I.4ヶ所の山間地で採集された蛾の種類および個体数の比較." 山口生物. 21. 18-21 (1994)
• [Publications] 河村信子・升島裕子・遠藤克彦: "山口県中東部(山口盆地およびその周辺)における蛾の調査II.山口盆地およびその周辺の山間地で採集された蛾の種類のリスト." 山口生物. 21. 22-31 (1994)
• [Publications] 伊藤靖子・三笘英代・遠藤克彦: "山口県中東部(山口盆地およびその周辺)における蛾の調査III.1994年の調査で山口県で新しく採集された蛾類のリスト." 山口生物. 22. 30-38 (1995)
• [Publications] 三笘英代・伊藤靖子・遠藤克彦: "山口県中東部(山口盆地およびその周辺)における蛾の調査IV.個体数と種類構成の季節的変動." 山口生物. 22. 39-43 (1995)