細胞質特異性を有する核遺伝子の単離とその機能に関する分子生物学的研究

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06660007
• Research Institution: OKAYAMA UNIVERSITY
• Principal Investigator: 村田 稔 岡山大学, 資源生物科学研究所, 助教授 (20166292)
• Keywords: 核細胞質相互作用 / コムギ / ディファレンシャルスクリーニング / ミジェット染色体 / ライムギ / YAC

Research Abstract

本研究は、ライムギ細胞質を有する普通系コムギ(cereale)-CSに依存する小型染色体(midget)から、ライムギ細胞質のオルガネラに作用しその機能を制御する核遺伝子の単離を目的として計画された。酵母人工染色体(YAC)ベクターを使い、染色体のテロメア領域のクローニングを行い、テロメアYACクローンを起点としたYACクローンの整列化を試みた。しかし、得られたクローンの多くに構造変化が認められ、整列化は非常に困難となった。この問題を解決すべく酵母のrad二重突然変異体を導入したが、得られる形質転換クローンはごくわずかであった。そこで、ストラテジーを変更し、(cereale)-CSからcDNAライブラリを作成し、直接この系統に特異的なcDNAを選び出すことにした。そのため、ディファレンシャルスクリーニング法に改良を加え、ライムギとコムギから合成したcDNAをプローブに用いた。その結果、ライムギ型のcDNAが1種選び出された。塩基配列から、これはライムギ葉緑体DNAにコードされているRuBiscoのラージサブユニット(rbcL)遺伝子であることが明らかとなった。この方法では一般的に、発現量の多いmRNAがcDNAとしてクローン化され易く、実際選抜されたクローンの多くがrbcL、rbcS (RuBisco small subunit)やcab (chlorophyll a/b binding protein)のcDNAであった。今後は、cDNAの均一化(normalization)をはかるなどしてこの方法をさらに改良する必要があると考えている。

Research Products

• [Publications] W.J.Raupp: "Classical and Molecular Cytogenetic Analysis" Agriciltural Experiment Station,Kansas State Univ.,Manhattan, 217 (1995)