リコンビナント牛LH抗原を用いた去勢ワクチンの開発

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06660413
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 津曲 茂久 日本大学, 農獣医学部, 助教授 (80120509)
• Keywords: リコンビナ-ト / 牛LH / ワクチン

Research Abstract

1.牛LHヌクレオチド1個を含んだトリオバアルブミンDNAをPCR法で増幅するために、両端のプライマーを合成し、増幅を計った。
2.強力な蛋白発現能力を持つとされる大腸菌プラズミドのpETを増幅するために、コンピテント細胞にトランスフォームした。
3.増殖したpETプラズミドを取り出し、2種類の制限酵素で切断した後、そのpETプラズミドにPCR法で増幅した牛LH含有トリオバアルブミンDNAを挿入した。
4.挿入されたpETプラズミドをコンピテント細胞にトランスフォーム、増殖し、ミニプレップ材料の制限酵素切断により確認した。
5.挿入大腸菌を増殖させ、蛋白抽出を行い、ウエスタンプロチングにより、オバアルブミンの明瞭なバンドと僅かなLHのバンドを検出した。
6.牛LHオリゴヌクレオチドをトリオバアルブミンDNAに3箇所追加挿入した。
7.挿入箇所の配列をジデオキシ法で確認した。
8.現在、pETに新たにLHオリゴヌクレオチドを挿入したDNAをライゲーションし、その蛋白質の検出を行っている。