1994 Fiscal Year Annual Research Report
極長鎖脂肪酸アシルCoA脱水素酵素欠損症患者の遺伝子解析
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06670162
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
青山 俊文 信州大学, 医学部, 助教授 (50231105)
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| Keywords | 脂肪酸代謝異常 / 脂肪酸アシルCoA脱水素酵素 / in frame deletion / RT-PCR / double deletion / exon skipping / PCR / cDNA発現 |
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| Research Abstract |
極長鎖脂肪酸アシルCoA脱水素酵素(VLCAD)欠損症患者に由来する8例の皮膚繊維芽細胞から総RNAを抽出し,RT-PCR法によりcDNAを調製した。10組のforward・reverseプライマーを合成し,各cDNA標品をPCRにて増幅させ,得られたcDNAフラグメントをシークエンスして変異解析結果を得た。VLCAD患者番号(1〜8)の順に変異を記載する。
1.309-310の2base,1435-1532の98baseと1606-1609の4baseから或るdouble deletion,heterozygous
2.1078-1182の105base deletion,homozygous
3.2と同一
4.343-477の135base deletion,1837(C→T),heterozygous
5.388-390の3base deletion,homozygous
6.892-894の3base deletion,homozygous
7.6と同一
8.388-390の3base deletion,1144(A→C),heterozygous
上述したように3種の変異は2人の患者に共通しているが,hot spotは存在しないようにである。これらの変異を持つDNAを発現プラスミド(pCXN_2)に入れ,各々をCHO細胞で発現させると,合成されたmRNA又は蛋白のいずれかが極度に不安定であり,これらの変異がdisease causing mutationであることが証明された。deletion変異が多いことから,ゲノムDNAレベルでの変異解析の重要性が示唆された。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Kamijo,T.et al.: "Mitochondrial trifunctional protein deficiency" J.Clin.Invest.93. 1740-1747 (1994)
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[Publications] Aoyama,T.et al.: "RatVLCAD,a novel mitochondrial acyl-CoA dehydrogenase……" J.Biol.Chem. 269. 19088-19094 (1994)
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[Publications] Souri,M.et al.: "Asensitive assay of acyl-CoA oxidase by coupling……" Anal.Biochem.221. 362-367 (1994)
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[Publications] Aoyama,T.et al.: "Molecular cloning and functional expression of……" Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 1113-1118 (1994)
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[Publications] Aoyama,T.et al.: "Peroxisomal acyl-CoA oxidase is a rate-limiting……" Biochem.Biophys.Res.Commun.201. 1541-1547 (1994)
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[Publications] Kamijo,T.et al.: "Structural analysis of cDNAs for subunits of human……" Biochem.Biophys.Res.Commun.199. 818-825 (1994)
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[Publications] Aoyama,T.et al.: "Anal.Biochem." Aguantitative method for cDNA-directed expressionin press……,
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[Publications] Aoyama,T.et al.: "J.Clin.Invest" Purification of human VLCAD and characterizationin press……,
