ストレプトリジンO分子の赤血球膜上での会合と溶血機構の超微細形態的解析

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06670303
• Research Institution: Kitasato University
• Principal Investigator: 関矢 加智子 北里大学, 薬学部, 講師 (30050579)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 壇原 宏文 北里大学, 薬学部, 教授 (40114558) ; 二重作 豊 北里大学, 医療衛生学部, 教授 (50014197)
• Keywords: ストレプトリジンO / SLO / 溶血機構 / 超微細形態 / ネガティブ染色 / 赤血球膜 / 免疫電顕 / 孔形成毒素

Research Abstract

当該研究は、A群溶血レンサ球菌の産生するストレプトリジンO(SLO)による生体膜傷害機構を電子顕微鏡を用いて、超微形態的に解析することを目的としている。
1.平成6年度の研究計画の第一に掲げられた内容は、再現性の良い電顕観察結果を得るための実験材料および実験条件を検討することであった。
(1)電子線損傷に耐える強くて薄い試料支持膜の作製について検討し、改良に成功した。
(2)安定した赤血球膜ならびに赤血球ゴ-スト膜の作製については、既報(J.Bacteriol.1993.9)のリングならびに冠状構造を再現性よく電顕観察可能な凍結保存条件を設定することに成功した。このため、ゴ-スト膜の長期保存が可能になり、常時安定した同一条件の赤血球膜が利用でき、実験時間を大幅に短縮できるようになった。
2.このような成果から得られた実験材料を用い、本年度における主目的であった、SLOの赤血球膜上での会合、リング形成ならびに冠状構造の形成、孔形成による溶血に至る過程を、一次抗体に抗SLO抗体、二次抗体に金コロイド標識IgG抗体を用いた免疫電顕のネガティブ染色像により解析した。
(1)温度非依存的に進行するSLOの赤血球膜への結合の第一段階の過程
(2)温度依存的なリングならびに孔形成の第二段階の過程、を証明することができた。
3.さらに、次年度の研究計画である日本で初めて購入された電子エネルギー損失分光型透過電顕EM 902 Aを用いてのリポソームでの解析の予備実験も開始することができた。
以上のごとく、本年度に予定した研究目的をほぼ達成することができた。

Research Products

• [Publications] 関矢 加智子: "分子の配列を電顕で見る-ストレプトリジンOにより形成させる赤血球膜の孔-" 日本細菌学雑誌. (印刷中). (1995)
• [Publications] Sekiya,K.et al.: "Analysis of pore-formation by streptolysin O in immunoelectron microscopy." Proc.13th Intl.Cong.Electr.Microsc.3A. 247-248 (1994)