ジーンターゲティングによるB細胞リセプターの機能の解析

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06670362
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 中村 哲也 順天堂大学, 医学部, 助手 (30189047)
• Keywords: B細胞リセプター / Ig-α / Ig-β

Research Abstract

1.ヒトIg-βのgenomic cloningを終了し、Ig-β遺伝子が約2kbの長さにわたり4つのエクソンに分かれて存在することを明らかにした。これにより,既にクローニングされているIg-α遺伝子とあわせ、Ig-α,Ig-βのジーンターゲッティングの準備が終了した.
2.B細胞株を用いた遺伝子導入の予備実験を行い、B細胞株での遺伝子導入の効率がかなり低いことを明らかにした。
3.2の結果を考慮し、目的を達成するための第2の方法としてIg-α、Ig-βを欠如したB細胞の突然変異株の誘導を試みた。B細胞株(Ramos,Daudi)に300-500radのγ線照射を行った後、培養液中に抗IgM抗体を加え表面IgM陽性のwild typeの増殖を抑制することで表面IgM陰性のクローンを選択的に増殖させ、最終的にpanning法で表面IgM陰性の変異B細胞株を得た。今後、これらのクローンの内、Ig-αまたはIg-βの欠損が表面IgMの消失の原因となっているものを同定し、遺伝子導入の実験に使用する。
4.Ig-βのgenomic cloningを終えたことで、当初の目的に必要な材料がそろったことになりまず第1段階が終了したと考えられる。しかしながら、予備実験の結果、これらの材料を用いhomologous recombinationを誘導することは確率的に必ずしも容易でないことも明らかとなり、平行して前述の方法を試み、当初の目的をめざす。