種々のTdTの発現パターンに伴うT細胞・B細胞レパトアと自己免疫疾患マウスの誘導

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06670484
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 小守 壽文 大阪大学, 医学部, 助手 (00252677)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 吉田 進昭 大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 免疫部門, 部長 (10250341) ; 谷 慶彦 大阪大学, 医学部, 助手 (10252652)
• Keywords: TdT / リンパ球レパトア / ジーンターゲティング / T細胞レセプター / 免疫ブロブリン

Research Abstract

1.Tdtプロモーター領域をPGKneo遺伝子、lckプロモーター、あるいはEμV_Hプロモータで置換し、PGKneo,PGKtkを含んだターゲティングベクターを作製し、これらのベクターをelectroporationblotによりES細胞に導入、G418、gancyclovirによる二重選別後、Southernによりそれぞれのノックアウトクローンを同定した。
2.これらのノックアウトクローンをC57BL6のblastocystに注入し、毛色によるキメリ ズムが70-100%の雄のキメラマウスを数匹づつ得た。
3.これらの雄のキメラマウスを雌のC57BL6と交配させた。PGKneo遺伝子、あるいはEμV_Hプロモーターで置換したキメラマウスは全てgermline transmissionし、それぞれのヘテロ接合体が得られた。更にこのヘテロ接合体を交配させホモ接合体も得ている。すなわち、いわゆるTdtノックアウトマウスとTdtのプロモーター領域がEμV_Hプロモーターで置換された二種類のホモ接合体を得たわけである。lckプロモーターで置換したキメラマウスは、現在雌のC57BL6との交配を開始した所である。
4.EμV_Hプロモーターで置換したホモ接合体の胸腺細胞と脾臓細胞を抗Tdt抗体で染色したところ、T細胞で弱くそして本来染色されないB細胞で強く染色された。現在T細胞のβ鎖遺伝子、B細胞のIgH鎖遺伝子及びL鎖遺伝子のN領域の有無を、PCR法により各V(D)J結合部を増幅し、塩基配列を検索中である。

Research Products

• [Publications] Toshihisa Komori: "An aberrant splicing using a 3′ cryptic splice sitl within CHI exon induces truncated μ-chain production." Immunology. (発表予定).
• [Publications] Toshihisa Komori: "Deletion to the 3′ splice site of the leader-variable region intron of immunoglobulin Aeavy chain genes induces a direct splicing of erader to constant region,resulting in the prodaction μ truniated μ chains." European Journal of Immunogenetics. (発表予定).
• [Publications] 小守 壽文: "T細胞レセプター遺伝子の多様性とN領域" 臨床免疫. 27. 341-348 (1995)
• [Publications] 小守 壽文: "TdTノックアウトマウスとT.B細胞レパトア" 免疫 1994-1995. 138-147 (1994)
• [Publications] 小守 壽文: "Tdtによる免疫系多様性の形成" Medical Immunology. 27. 53-60 (1994)