1994 Fiscal Year Annual Research Report

ミトコンドリア病の発症病態及びスクリーニングに関する研究

Research Project

Project/Area Number	06670760
Research Institution	Tohoku University
Principal Investigator	宮林重明東北大学, 医学部, 助教授 (20174203)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	相川純一郎東北大学, 医学部附属病院, 講師 (30191844)
Keywords	ミトコンドリア病 / FACScan / 電子伝達系酸素 / ミトコンドリアDNA(mtDNA) / SV40 / cybrid
Research Abstract	1)FACScanを用いたミトコンドリア機能障害のスクリーニング PDH欠損とMELASの線維芽細胞をFACScanで解析し,これらの細胞が正常対照と違ったパターンを示すことが証明された.現在地の欠損細胞を検討中である. 2)培養細胞の電子伝達系酵素活性測定およびATP産生能の検索ミトコンドリア病では電子伝達系酵素の複合体Iが最も障害されやすいが,測定上細胞内膜のATP産生に関与する酵素(rotenone sensitive)の測定は非常に困難である.今回われわれは1mg/mlのジギトニンを1分間処理し,細胞質を取り除くことにより電子伝達系酵素活性測定法を確立した.またmtDNA変異をもつ細胞のinvitro系での生体内のredox stateを培養細胞をglucose添加PBSでインキュベーション後,乳酸・ピルビン酸を測定しその比を求めることによりredoxを証明した.ATP産生をルミノメーターを用いて測定する方法は現在進行中である. 3)SV40を用いた変異ミトコンドリア病態解明 mtDNAの点変異(MELAS変異)及び欠失をもつ病例の培養線維芽細胞に複製開始部欠損SV40DNAをlipofectinを用いて導入し,クローン化後形質が安定した細胞を得た.ミトコンドリアDNAの変異率の違いでの電子伝達系酵素測定の結果,従来言われているより低変異率で電子伝達系機能障害を認めることが証明された.またmtDNAを除去したHeLa細胞(ρ0細胞)とmtDNA変異を有する線維芽細胞との融合細胞(cybrid)はすでに準備できた.

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] 宮林重明他: "Accumulation of mtDNA with a mutation at position 3271 in tRNALeu(UUR)gene introduced from a MELAS patient to HeLa cells lacking mtDNA results in progressive inhibition of mitochondrial respiratory function" Biochem.Res.Commun.197. 1049-1055 (1993)
[Publications] 宮林重明他: "Fetal liver biopsy for prenatal diagnosis of carbamoyl phosphate synthetase deficiency." Am.J.Perinatol.11. 160-162 (1994)
[Publications] 宮林重明他: "Nuclear but not mitochondrial genome involvement in human age-relatrd mitochondrial dysfunction:functional integrity of mitochondrial DNA from aged subjects." J.Biol.Chem.269. 6878-6883 (1994)
[Publications] 宮林重明他: "Functional and morphological abnormalities of mitochondria in human cells containing mitochondrial DNA with pathogenic point mutations in tRNA genes." J.Biol.Chem.269. 19060-19066 (1994)
[Publications] 宮林重明他: "Pancreatic beta-cell secretory defect associated with mitochondrial point mutation of the tRNA(LEU(UUR))gene:A study in seven families with mitochondrial encephalomyopathy,lactic acidosis and stroke-like episodes(MELAS)." Diabetologia. 37. 818-825 (1994)
[Publications] 宮林重明他: "Influence of aging on onset of mitochondrial disease." J.Inher.Metab.Dis.17. 606-610 (1994)

1994 Fiscal Year Annual Research Report

ミトコンドリア病の発症病態及びスクリーニングに関する研究

Principal Investigator

宮林 重明 東北大学, 医学部, 助教授 (20174203)

Research Products

[Publications] 宮林重明他: "Accumulation of mtDNA with a mutation at position 3271 in tRNALeu(UUR)gene introduced from a MELAS patient to HeLa cells lacking mtDNA results in progressive inhibition of mitochondrial respiratory function" Biochem.Res.Commun.197. 1049-1055 (1993)

[Publications] 宮林重明他: "Fetal liver biopsy for prenatal diagnosis of carbamoyl phosphate synthetase deficiency." Am.J.Perinatol.11. 160-162 (1994)

[Publications] 宮林重明他: "Nuclear but not mitochondrial genome involvement in human age-relatrd mitochondrial dysfunction:functional integrity of mitochondrial DNA from aged subjects." J.Biol.Chem.269. 6878-6883 (1994)

[Publications] 宮林重明他: "Functional and morphological abnormalities of mitochondria in human cells containing mitochondrial DNA with pathogenic point mutations in tRNA genes." J.Biol.Chem.269. 19060-19066 (1994)

[Publications] 宮林重明他: "Pancreatic beta-cell secretory defect associated with mitochondrial point mutation of the tRNA(LEU(UUR))gene:A study in seven families with mitochondrial encephalomyopathy,lactic acidosis and stroke-like episodes(MELAS)." Diabetologia. 37. 818-825 (1994)

[Publications] 宮林重明他: "Influence of aging on onset of mitochondrial disease." J.Inher.Metab.Dis.17. 606-610 (1994)

宮林重明東北大学, 医学部, 助教授 (20174203)