成長ホルモンによる遺伝子発現調節の分子生物学的研究

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06671014
• Research Institution: 山梨医科大学
• Principal Investigator: 会田 薫 山梨医科大学, 医学部, 助手 (50184015)
• Keywords: 成長ホルモン / Steroid 15α hydroxylase / P450_<15α> / 遺伝子発現調節 / 性差

Research Abstract

【目的】 マウスsteroid 15α hydroxylase(P450_<15α>)は多くの純系マウスにおいて雄のみに発現しており、下垂体摘出マウスを用いた実験から、雄型の成長ホルモンGH分泌パターン(スパイク状、雄は持続型)がこの発現を調節していることを我々はすでに報告した。我々はin vitro transcription assay等によりP450_<15α>geneのpromoter領域を決定した。本研究では、このGHによる性特異的転写調節を明かにすることを目的とした。
【方法】 450_<15α>のpromoter領域に相当するoligonucleotideをprobeとしてマウス肝cDNAexpression libraryをscreeningし、2個のDNA結合蛋白をcloningした(clone p109、clone108)。
【結果】 clone p109はHMG box proteinをcodeしていた。clone p109のcodeする蛋白を大腸菌に発現させ抗体を作製した。しかし、肝におけるこのmRNA、および蛋白の発現には性差がなかった。さらにpost-translational modification、特にリン酸化の有無を、抗phosphotyrosine抗体を用いて検討したが、雌雄共にこの蛋白はリン酸化されていなかった。
もう1つのDNA結合蛋白であるclone108は、sequenceの結果、マウスreplication factor C、140kDa subunic cDNA(mRFC140)と同一であった。clone108がcodeする蛋白を大腸菌に発現させ、抗体を作製した。そしてマウス肝におけるこのmRNA、および蛋白の発現をNorthern blot、Western blotで検討したが、それらに性差はみられなかった。
【結論】 我々は、性特異的発現を示すマウスsteroid 15α hydroxylase遺伝子のpromoter領域に結合する核蛋白cDNAを2種cloningした。しかし、これら2種の核蛋白の発現は、mRNA、蛋白レベル共に性差なく、従って我々が予期したGH分泌パターンに影響されなかった。これらの結果は、これら核蛋白はP450_<15α>のbasic expressionには影響するかもしれないが、性特異的発現には関与しないと考えられた。