トレハロースを含有する肺保存液(ET-K液)における培養内皮細胞の生存能力の検討

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06671339
• Research Institution: KYOTO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 乾 健二 京都大学, 胸部疾患研究所, 講師 (10193567)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 横見瀬 裕保 京都大学, 胸部疾患研究所, 助手 (80231728)
• Keywords: 内皮細胞 / MTT assay / trypan blue exclusion法 / ET-Kyoto液 / UW液 / IT-Kyoto液 / ユーロコリンズ液

Research Abstract

内皮細胞系“F-2"はヌードマウスから確立された培養細胞系で、同一の特性をもっており、再現性の高い実験結果が得られる利点がある。
(1)細胞の冷保存効果のtrypan blue exclusion 法による評価
内皮細胞を大気下、4℃で24時間から48時間冷保存しtrypan blue溶液を加え細胞数を計測した。全細胞数に対する生細胞数の割合を細胞の生存活性(%)とした。24時間冷保存後のET-Kyoto液群、IT-Kyoto液群、ユーロコリンズ液群、UW液群の生存活性はそれぞれ56.2±1.9%(平均値±標準誤差), 73.7±2.3%, 39.9±4.9%, 62.8±2.3%で、48時間冷保存後の生存活性は同様にそれぞれ49.5±4.7%, 59.5±0.7%, 29.2±2.5%, 55.3±7.6%であった。ET-Kyoto液、IT-Kyoto液、UW液群が、ユーロコリンズ液群より細胞の生存活性が有意に高かった。
(2)細胞の冷保存効果のMTT assay 法による評価
内皮細胞を大気下、4℃で24時間から168時間冷保存し、MTT溶液に入れ替え、37℃で 4時間培養した。48時間以降ET-Kyoto液群,UW液群がユーロコリンズ液群より有意に吸光度が高く、72時間以降ET-Kyoto液群がIT-Kyoto液群より有意に吸光度が高く、120時間以降ET-Kyoto液群がUW液群より有意に吸光度が高かった。
(3)まとめ
我々はヌードマウス由来の培養内皮細胞系を用いて、細胞の冷保存効果において、ET-Kyoto液がUW液よりすぐれていること、IT-Kyoto液はUW液と同等の効果をもちユーロコリンズ液よりすぐれた効果をもつことを示した。

Research Products

• [Publications] T Bando, K. Inui, et al.: "Effect of newly developed solutions containing trehalose on 20-hour canine lung preservation." J Thorac Cardiovasc Surg. 108. 92-98 (1994)
• [Publications] K Yagi, K Inui, et al.: "Inhibition of reperfuion injury by Human Thioredoxin(ADF)in canine lung transplantation." J Thorac Cardiovasc Surg. 108. 913-921 (1994)
• [Publications] H Yokomise, K. Inui, et al.: "Effect of recombinant Human Adult T-Cell Leukemic-derived Factor(rhADF)on rat lung eperfusion injury." Respiration. 61. 99-104 (1994)
• [Publications] T Fukuse, K Inui, et al.: "Attenuation of ishemia-reperfusion injury by Human Thioredoin." Thorax. 50. 387-391 (1995)
• [Publications] K Muro, K Inui, et al.: "Expression of Adult T-Cell Leukemia Derived Factor/Human Thioredoxin in allotransplantated canine Lung." Surgery Today. 25. 626-632 (1995)