移植腎浸潤細胞におけるT細胞抗原レセプターの解析

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06671613
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Research Institution: Kitasato University
• Principal Investigator: 小幡 文弥 北里大学, 医学部, 講師 (60129236)
• Keywords: T細胞レセプター / 移植腎拒絶反応 / クローナリティー

Research Abstract

ヒト移植腎の拒絶反応に、実際にどのようなT細胞集団が動員されるのかを検索するため、腎浸潤T細胞が表現しているT細胞抗原レセプター(TCR)β鎖cDNAの塩基配列決定を行った。移植後、拒絶され摘出を余儀なくされた腎2例から、コラゲナーゼ処理、パーコール比重遠心法により浸潤リンパ球を分離し、さらに抗CD25抗体と免疫磁気ビーズを用いてCD25^+活性化T細胞画分を得た。mRNA分離およびcDNA合成後、PCR法で増幅したTCRβ鎖cDNAをベクターに組み込み、バクテリアによるクローニングの後塩基配列決定を行った。1例目の拒絶腎浸潤T細胞については、31個のTCRβcDNAを無作為に選んで塩基配列決定を行った結果、CDR3配列も全く同一のcDNAが、Vβ6.9-Jβ1.2で6個、Vβ3.1-Jβ2.1で3個、Vβ3.1-Jβ2.7,Vβ5.6-Jβ2.5,Vβ12b-Jβ2.3で2個ずつ検出された。2例目の拒絶腎浸潤T細胞については、無作為に選んだ36個のTCRβ鎖cDNAのうち、CDR3配列も同一のcDNAは、Vβ17.1-Jβ2.2で17個(全体の約半数)、Vβ5.2-Jβ2.5で2個検出された。この症例については、患者末梢血T細胞についても同様の解析を行ったが、このような偏りは検出されなかった。また我々は以前、in vitro MLRに動員されるTCRの解析を行い、その場合30個前後のcDNA解析では、CDR3配列が同一のcDNAはほとんど検出されないことを示した(ポリクローナリティー)。それに対し本研究では、in vivoでの移植腎拒絶反応には、極めて限られたT細胞クローンが動員されることが明かとなった。(オリゴクローナリティー)。

Research Products

• [Publications] Obata F.et al.: "Sequence analysis of the T-cell receptor expressed by renal-allograft infiltrating cells." Transplantation Proceedings. 26. 861-863 (1994)
• [Publications] Akiyama K.et al.: "Polymerase chain reaction (PCR)/single strand conformation polymorphism (SSCP) analysis of the human HLA-DQB region." Japanese Journal of Legal Medicine. 48. 38-43 (1994)
• [Publications] Yabe N.et al.: "Genetic analysis of hydatidiform moles utilizing the oligonucleotide DNA typing of the HLA-DRB gene." Placenta. 15. 541-549 (1994)
• [Publications] Obata F.et al.: "T-cell oligoclonality in renal allograft-infiltrating lymphocytes demonstrated by restricted T-cell receptor diversity." Transplantation Proceedings. 27(in press). (1995)
• [Publications] 小幡文弥: "遺伝子診断と遺伝子治療(現代化学増刊23)" 村松正実、平井久丸編(東京化学同人), (1994)
• [Publications] Obata F.et al.: "HLA-1993 in Japan" Sonoda T.(editor),Oxford University(in press), (1995)