1994 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト腸内の嫌気性菌の産生する蓚酸デカルボキシラーゼの精製
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06671616
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| Research Institution | Teikyo University |
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Principal Investigator |
伊藤 晴夫 帝京大学, 医学部, 教授 (20009583)
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| Keywords | 尿路結石 / 蓚酸カルシウム / 腸内細菌 / 蓚酸分解菌 / 薬剤感受性 / 蓚酸分解酵素 / 再発予防 |
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| Research Abstract |
ヒトの糞便中より蓚酸を分解する菌を分離し、これがEubacterium lentumであることは既に報告した。これはDNA-DNA hybridization法による、遺伝子による分類でも確かめられ、Eubacterium lentum WYH-1と命名した。この菌の各種抗生剤に対する感受性を調べると、日常よく使用する薬剤にも感受性を示し、胆汁の成分であるデオキシコール酸によってもその発育が抑制された。
この菌体のcell-free extractはco-factorとしてsuccinate,CoA,ATP,Mg,thiamin pyrophosphateの存在下で高い蓚酸分解活性を示した。succinate,CoA,ATP,Mgはsuccinyl-Co Aに置き換えることが出来た。Sephacryl S-300HRを用いて硫酸アンモニウム沈殿30-70%画分を分子篩クロマトグラフィーすることにより、succinate,CoA,ATP,Mgよりsuccinyl-CoAを生成するsuccinate:CoA ligase、succinyl-CoAをoxalyl-CoAに変えるsuccinyl-CoA transferase、oxalateをformateに変えるoxalyl-CoA decarboxylase、およびformyl-CoA transferase活性を有する分画を得ることが出来た。このように、この菌における蓚酸分解に関与する酵素は4つと予想された。
Oxalyl-CoA decarboxylase活性のある画分をDEAE Cellulofine、およびPhenyl Sepharoseで精製すると、比活性が9.2U/mgの酵素が得られた。SDS-PAGEでみると、ほとんど単一のバンドであることが判明した。分子量はゲル瀘過より約200kDa,SDS-PAGEより約62kDaであるのでtetramerを形成していると予想された。Formyl Co-A transferaseをDEAEセルローズクロマトグラフィーにかけると、その比活性を約0.8U/mlまで上げることが出来た。現在、この外の酵素の単離も試みている。
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[Publications] Haruo Ito et al: "Effect of Ethyl Icosapentate on Urinary Calcium Excertion in Calcium Oxalate Stone Formers" Urologia Internationalis.
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[Publications] Haruo Ito et al.: "Clinical and Biochemical Features of Uric Acid Nephrolithiasis" European Urology.
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[Publications] 伊藤 晴夫 他: "ヒト糞便中の蓚酸分解菌の分離・同定" 医学のあゆみ. 169. 1259-1260 (1994)
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[Publications] Y.Nakagawa,M.Netzer,E.K.Michaels,F.Suzuki,H.Ito: "Nephrocalcin in patients with renal cell carcinoma" The Journal of Urology. 152. 29-34 (1994)
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[Publications] 鈴木 文夫,伊藤 晴夫,Eli.K.Michaels: "Nephrocalcin:原発性腎細胞癌の新たな腫瘍マーカーとしての有用性について" 泌尿器外科. 7. 783-786 (1994)
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[Publications] 正井 基之,伊藤 晴夫: "主な疾患の病態・臨床症状・治療・予後(3)腎尿管結石" 臨床看護. 20. 1615-1620 (1994)
