一酸化窒素(NO)の卵巣機能調節に及ぼす影響に関する研究

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06671633
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 久保田 俊郎 東京医科歯科大学, 医学部, 講師 (50126223)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鎌田 周作 東京医科歯科大学, 医学部, 講師 (80169606) ; 麻生 武志 東京医科歯科大学, 医学部, 教授 (60093176)
• Keywords: 一酸化窒素(NO) / ブタ顆粒膜細胞 / 細胞培養 / ステロイド産生 / NO合成酵素 / アロマターゼ活性 / cGMP

Research Abstract

この研究は、卵巣の卵胞発育に重要な顆粒膜細胞の機能に及ぼす一酸化窒素(NO)の影響、特に培養ブタ顆粒膜細胞(PGC)における性ステロイド産生に及ぼすNO/NO合成酵素(NOS)の影響について研究することを目的とする。昨年度は、中卵胞由来のPGCにおいてNO合成酵素阻害剤であるN^G-monomethyl-L-arginine(LNMMA)のprogesterone(P)分泌やestradiol(E_2)分泌への影響を検討した。LNMMAは、PGCのE_2分泌を有意に促進し(p<0.01)、またgonadotropin刺激後のE_2やP分泌をも用量依存性に有意に促進し(p<0.01)、一方LNMMAはPGCの細胞増殖能には影響を及ぼさなかった。よってNOはPGCにおけるステロイド産生能に対し抑制的に作用し、gonadotropinによるE_2・P分泌調節にも深く関与することが証明された。
本年度は、中卵胞由来PGCにおけるNOSの局在を確認する目的でconstitutive NOS(cNOS)やinducible NOS(iNOS)の特異的な一次抗体を用いABC法にて免疫染色を行い、cNOSおよびiNOSがPGCの細胞質に局在することが確認された。次にNO供与剤であるNOC18のPGCにおける性ステロイド産生への影響を検討すると、1mM NOC18は単独添加・FSHおよびhCG添加群でともにE_2分泌を有意に抑制した(P<0.01)。さらにtritiated water法にてaromatase活性値を測定すると、NOC18(0.1〜1mM)はaromatase活性値を用量依存性に有意に抑制した(P<0.05)。またこの系におけるcyclic GMP(cGMP)の関与についても検討したところ、cGMPアナログである8-bromo-cGMPを単独にあるいはgonadotropinと同時に添加しても、PGCからのin vitroにおけるE_2・P分泌には有意な変化はみられなかった。以上により、NOはPGCのステロイド産生能を局所的に抑制し、その作用機序としてE_2産生に対しaromataseに直接働き、cGMPを介さないことが証明された。

Research Products

• [Publications] Kubota T.,et al.: "Autocrine/paracrine function of transforming growth factor-B1 in purcine granulosa cells" Human Reproduction. 9. 2118-2122 (1994)
• [Publications] Kubota T.,et al.: "Endothelin synthesis and receptors in human endometrium throughout the normal menstrual cycle" Human Reproduction. 10. 2204-2208 (1995)
• [Publications] Komada S.,et al.: "The role of endothelin-1 regulating human granulosa cell proliferation and steroidgenesis in vitro" Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 80. 3708-3714 (1995)
• [Publications] Masuda M.,Kubota T.,et al.: "The effect of nitric oxide on steroidogenesis in culture porcine granulosa cells." J.Assisted Reproduction and Gynetics.12. 13 (1995)
• [Publications] 増田 美香子,久保田 俊郎,他: "ブタ顆粒膜細胞のステロイド産生能及び細胞増殖能に及ぼす一酸化窒素の影響" 日本産科婦人科学会雑誌. 47. 277 (1995)
• [Publications] 増田 美香子,久保田 俊郎,他: "Sodium nitroprussideの培養ブタ顆粒膜細胞ステロイド産生能に及ぼす影響について" 日本内分泌学会雑誌. 71. 366 (1995)
• [Publications] Masuda M,Kubota T,et al.: "New Achievements in Research of Ovarian Function Frontiers in Endocrinology,volume13" Ares-Serono Symposia Publication,Rome Italy, 347 (1995)
• [Publications] Masuda M,Kubota T,et al.: "IX World Congress on IN VITRO FERTILIZATION and ASSISTED REPRODUCTION" Monduzzi Editore,Bologna Italy, 772 (1995)