1994 Fiscal Year Annual Research Report
抗estrone sulfataseモノクローナル抗体の作製とその特徴
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06671691
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
佐々木 寛 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (80125020)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
多田 聖郎 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (40197364)
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| Keywords | モノクローナル抗体 / エストロンサルファターゼ / 遺伝子移入 |
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| Research Abstract |
[目的]子宮内膜癌組織においてestrone sulfatase(ES)の活性異常増加が報告されているが、その酵素の組織局在性や、その酵素が同時にdehydroepiandrosten sulfatase(DHAS)活性を有するものかについては今だ不明である。そこで解決法の1つとして抗ESモノクローナル抗体(MoAd)の作製を試みた。
[方法]正常胎盤2コから鈴木らの方法に準じカラムクロマトグラフィーでモノピークを示す蛋白分画を抽出した。ついでBALA/cマウス2匹を抽出蛋白を計3回免疫し、electric fusion法でhybridom cellを作製。cloning後、ELISAとWestern blotでスクリーニングを行った。正常社と先天性魚鱗癬患者の胎盤とで比較免疫組織化学染色を行った。なお胎盤使用には、患者の同意を得た。
[成績]胎盤より抽出した蛋白は最終カラムの酢酸エチルで抽出するとES活性、DHAS活性の各々高活性ピークが2峯性に分離した。第1ピークはDHAS高活性、第2ピークはES高活性であった。第2ピークのみを免疫し、ELISA,Western blotでスクリーニングし最終的に11種のclone cellを得た。凍結切片を用い11種のES MoAbにより免疫組織染色を行ったところ11種全部が魚鱗癬胎盤には染色されなかった。一方正常胎盤には11種中9種の抗体が染色可能であり絨毛表面の栄養膜細胞に組織局在性を認めた。ES活性とDHAS活性制御作用がMoAbに存在するか検討したが全11種と両酵素の活性抑制はみられなかった。現在Arylsufatase C 遺伝子移入TD47細胞ができ、さらに抗体との反応性を検討中である。
[結論]凍結切片に使用可能な抗ES MoAbが得られた。
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[Publications] Hiroshi Sasaki: "Prostaglandins in the treatment of cancer" Anti-Cancer Drugs. 5. 131-138 (1994)
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[Publications] Hiroshi Sasaki: "A method for evaluation of muluticellular spheroid formation of gynecologic carcinoma cells" Jikeikai Medical Journal. 41(4). 417-427 (1994)
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[Publications] Hiroshi Sasaki: "Allelotype of Endometrial Carcinoma" Cancer Research. 54. 4294-4298 (1994)
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[Publications] Hiroshi Sasaki: "Quantitation of P540 aromatase immunoreactivity in human ovary during the menstrual cycle:relationship between the enzyme activity and immunoreactivity" J.Histochemistry and Cytochemistry. 42. 1565-1573 (1994)
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[Publications] Hiroshi Sasaki: "Aromatase activity of human gynecological carcinoma cell lines" Jikeikai Medical Journal. 41(4). 407-415 (1994)
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[Publications] Hiroshi Sasaki: "A Multivariate analysis of assessment of myometrial invasin of endometrial carcinoma by magnetic sesonance imaging" Gynecologic Oncology. 54. 298-306 (1994)
