1994 Fiscal Year Annual Research Report
新規カルボニル基代謝酵素(MALDO及びMALCO)の構造と機能解析
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06672208
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| Research Institution | Hokuriku University |
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Principal Investigator |
山本 郁男 北陸大学, 薬学部, 教授 (50069746)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宇佐見 則行 北陸大学, 薬学部, 助手 (60257483)
松永 民秀 北陸大学, 薬学部, 講師 (40209581)
渡辺 和人 北陸大学, 薬学部, 助教授 (30113038)
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| Keywords | アルコーナ / アルデヒド / オキシゲナーゼ / カンナビノイド / クローニング / MALCO / MALDO / P450 |
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| Research Abstract |
新規カルボニル基代謝酵素Microsmal Aladehyde Oxygenase(MALDO)及びMicrosomal Alcohol Oxygenase(MALCO)の構造と機能解析に関する研究に関して、平成6年度は以下の点を解明した。
1)各週令のddN系雄マウス肝ミクロソーム中のシトクロムP450 MUT-2(CYP2C29)の量をウエスタンブロッティング法により測定し、その含量と9-アントラアルデヒド及び11-oxo-△^8-tetrahydrocannabinolを基質としたMALDO活性との間に良い相関が見られた。また、マウスをフェノ-バルビタール100mg/kg 2日間前処理することによりCYP2C29のmRNA量が2倍増加することが明らかとなった。これはウエスタンブロッティングにより測定したミクロソーム中のCYP2C29の含量に良く対応する結果であった。
2)9-アントラアルヒドのMALDO活性を指標にデキサメタゾン処理ddN系雄マウス肝ミクロソームよりP450 MDX-A、雌モルモット肝ミクロソームよりP450 GPF-A、サル肝ミクロソームよりP450 JM-Cを各々精製した。これらP450はN末端アミノ酸配列の分析結果より、いずれもCYP2Bサブファミリーに属する分子種であることを明らかにした。
3)7-Hydroxy-△^8-tetrahydrocannabinolを基質としたMALCO活性を指標に、ddN系雄マウス肝ミクロソームよりP450 MDX-B、雌モルモット肝ミクロソームよりP450 GPF-B及び雌ニホンザル肝ミクロソームよりP450 JM-Eを精製した。これらP450はN末端アミノ酸配列の分析結果より、いずれもCYP3Aに属する分子種であった。
4)これらの結果り、9-アントラアルヒドのMALDO活性にはCYP2B分子種が、7-Hydroxy-△^8-tetrahydrocannabinolのMALCO活性にはCYP2A分子種が各々関与することが明らかとなった。また、CYP3Aに属すると考えられる分子種はいずれも高いテストステロン6β水酸化活性を有することも示された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] T.Matsunaga: "cDNA Cloning and Sequence of CYP2C29 Encoding p-240 MUT-2,a Microsomal Aldehyde Oxygenase" Biochim.Biophys.Acta. 1184. 299-301 (1994)
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[Publications] K.Watanabe: "Metabolic Reaction of Tolualdehydes by Microsomal Aldehyde Oxygenase (MALDO)in Lung" Jpn.J.Toxicol.Environ.Health. 40. 10 (1994)
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[Publications] K.Watanabe: "Oxidation of Tolualdehydes to Toluic Acide Catalyzed Cytochrome P450-Dependent Aldehyde Oxygenase in Mouse Liver" Drug Metab.Dispos.23. 261-265 (1995)
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[Publications] I.Yamamoto: "A Novel Metabolite,an Oxepin Formed from Cannabidiol with Guinea-Pig Hepatic Microsomes" J.Pharm.Pharmacol.47(in prsee). (1995)
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[Publications] N.Usami: "Formation of Carbon Monoxide During Mouse Hepatic Microsomal Oxidative Metabolism of Cannabidiol,Identification and Determination" Biol.Pharm.Bull.18(in prsee). (1995)
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[Publications] T.Matsunaga: "Metabolism of △^9-Tetrahydrocannabinol by Cytochrome P450 Isozymes Purified from Hepatic Microsomes of Monkeys" Life Sci.(in prsee). (1995)
