1994 Fiscal Year Annual Research Report
新しい胃癌関連抗原(Mr 110,000抗原)のcDNAクローニングと測定系確立
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06672309
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| Research Institution | Fukuoka University |
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Principal Investigator |
黒木 政秀 福岡大学, 医学部, 教授 (40122692)
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| Keywords | 胃癌関連抗原 / Mr110,000抗原 / 癌胎児性抗原(CEA) / モノクローナル抗体 / cDNAクローニング / 遺伝子クローニング / 腫瘍マーカー / 腫瘍関連抗原 |
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| Research Abstract |
1985年,アメリカNHのSshlomらは,大腸癌およびその肝ないし脾臓転移単の抽出液を免疫原として15個のマウスモノクロナール抗体(COL-1〜COL-15)を作製した(Cancer.,Res.45:5769,1985).その後、黒木もこの一連の抗体の解析に参加し,うち14個について癌胎児性抗原(CEA)との反応性など詳細なエピトープ・マッピングを報告した((Int.J.Cancer,44:208,1989).Scholomらは,最近これらの中の1つであるCOL-4が,調べたほとんどの樹立胃癌細胞には存在するが,他の組織由来の樹立癌細胞には存在しない分子量約110KDaの糖蛋白質抗原(Mr 110,000抗原)と交差反応し,この抗原が胃癌細胞の細胞膜に存在することを報告した(Cancer Res.,51:5694,1991).また,このMr 110,000抗原は,組織染色パターンや分子量の点から既存のCEA,EMA,CA19-9,CSLEXIなどとは異なる新しい腫瘍関連抗原であり,胃癌を識別する新しい腫瘍マーカーとなる可能性がある。
これまで目的とする胃癌抗原すなわちMr110,000抗原は,KATOIIIを含む調べた7種の樹立胃癌細胞すべてに存在することをすでに確認しており,まずこの抗原を精製してその化学的性状を解析した。即ち培養胃癌細胞KATOIIIから細胞膜分画を調製して可溶化し,目的抗原をCOL-4抗体アフィニティクロマトおよびゲルろ過で精製した。精製された抗原をアミノ酸特異的酵素で切断し,プロテイン・シークエンサーでアミノ酸配列を一部決定した。次にアミノ酸配列を基にcDNAをクローニングしその配列を決定した。培養胃癌細胞KATOIIIよりpoly(A)^+RNAを抽出し,Uni-ZAPベクターを用いてcDNAライブラリーをし,上記1で得られたアミノ酸配列に相当するオリゴヌクレオチドを合成し,これをDNAプローブとしてスクリーニングを行い,陽性クローンの塩基配列をジデオキシ法で決定した。この時点で新しい抗原であることが確認された。
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[Publications] Kuroki,Ma.,Kuwahara,M.,and Murakami,M.et al.: "Fractionation of carcinoembyonic antigen(CEA)and related antigens in normal adult fecces" Prparative Biochemistry. 24. 25-40 (1994)
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[Publications] Kuwahara,M.,Kuroki,Ma.,and Haruno,M.et al.: "Arapid colorimetric assay for carcinoembryonic antigen(CEA)-mediated cell adhision and analysis of CEA domains involved in the adhesion" Immunological Investigaion. 23. 367-380 (1994)
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[Publications] Murakami,M.,Kuroki,Ma.,and Arakawa,F.et al.: "Areference of the GOLD classification of monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigen to the domain structure of the carcinoembryonic antigen molecule" Hybridoma. 14. 19-28 (1995)
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[Publications] Kuroki,Ma.,Matsumoto,Y.,and Arakawa,F.et al.: "Reducing interference from heterophilic antibodies in a two-site immunoassay for carcinoembyronic antigen (CEA)by using a human/ mouse chimeric antibody to CEA as the tracer." Journal of Immunoligincal Methods. 180. 81-91 (1995)
