1995 Fiscal Year Annual Research Report
多機能性カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIVのリン酸化による活性調節機構
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06680570
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| Research Institution | Asahikawa Medical College |
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Principal Investigator |
亀下 勇 旭川医科大学, 医学部, 助教授 (60127941)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤澤 仁 旭川医科大学, 医学部, 教授 (10027039)
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| Keywords | プロテインキナーゼ / カルモデュリン / タンパク質リン酸化反応 / 細胞内情報伝達 / 中枢神経 |
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| Research Abstract |
(1)CaMキナーゼIVのリン酸化による活性調節:以前、カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIV(CaMKIV)は自己リン酸化により活性化されると考えられていたが、CaMKIV精製標品中に共存するCaMKIVキナーゼによる活性化であることが明らかになった。CaMKIV上のリン酸化部位としては、N末端に近い複数のSer残基と、Thr^<196>と、C末端に近いSer^<437>とが同定されたが、これらのうち、本酵素の活性化に関与する部位は、最近の結果ではThr^<196>と考えられている。このようにCaMKIVは様々なプロテインキナーゼやプロテインホスファターゼとのクロストークを介した活性調節を受けることが次第に明らかになってきた。そこで今回、CaMKIVを中心としたクロストークを解析する目的で新しいゲル内リン酸化法を開発した。この方法は標的タンパクのリン酸化部位周辺のペプチドをデザインし、ゲル内でその基質に特異的なプロテインキナーゼを検索できるすぐれた方法であり、プロテインキナーゼを介したシグナル伝達の流れを解明するための有力な手段となるものと期待される。(2)ラット大脳から単離精製されたCaMBP64のリン酸化部位の解析と遺伝子クローニング:ラット大脳からCaMKIVを精製する過程で新たなCaM結合タンパク質(CaMBP64)が単離された。このタンパク質はCaMキナーゼIIならびにcAMP依存性プロテインキナーゼによりリン酸化され、その主要リン酸化部位周辺のアミノ酸配列は、SQPSFQWRQPSLDVDVGDであることがわかった。さらにこのタンパクの遺伝子クローニングを行ない、535の全アミノ酸配列を決定したところ、CaMBP64は63kDaCaM依存性ホスホジエステラーゼのラットアイソフォームであることが明らかになった。
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[Publications] 亀下 勇: "ラット大脳CaMキナーゼIVの酵素化学的性質" 神経化学. 33. 372-373 (1994)
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[Publications] Atsuhiko Ishida: "A Novel Synthetio Peptide Inhibitor which is speciqicfor Calmodulim-dependent Protein Kinase II" J.Neurochem.65. S21 (1995)
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[Publications] Isamu Kameshita: "Properties and Characterization of Calmoduliu-dependent Protein Kinase IV (CaM-Kinase IV) free of CaM-Kinase IV Kinase from Rat Cerebral Cortex" J.Biochem.117. 85-90 (1995)
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[Publications] 亀下 勇: "CaMBP64の分子的性質とその組織分布" 神経化学. 34. 84-85 (1995)
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[Publications] Atsuhiko Ishida: "A Novel Highly Specific and Potent Inhibitor of Calmodulin-dependent Protein Kinase II" Biochem.Biophys.Res.Commun.212. 806-812 (1995)
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[Publications] Isamu Kameshita: "Detection of Protein Kinase Activity toward Oligopeptide in Sodium Dodecyl Sulqate-polyacrylamide Gel" Anal.Biochem.(印刷中). (1996)
