1994 Fiscal Year Annual Research Report
肝ミクロゾームメタルプロテアーゼの特異的インヒビターの精製と構造解析
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06680588
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
川畑 俊一郎 九州大学, 理学部, 助手 (90183037)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中川 和憲 九州大学, 医学部, 助手 (50217668)
牟田 達史 九州大学, 理学部, 助手 (60222337)
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| Keywords | プロセシングプロテアーゼ / ジンクペプチダーゼ / エンドペプチダーゼ-24.15 |
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| Research Abstract |
ウサギ肝臓約1kgより50μgのMEPが精製できるが、通常、インヒビターは、その標的酵素より量的に多く存在することから、MEPの際に用いた同程度の精製スケールでそのインヒビターも精製可能と考えられた。肝臓の界面活性剤抽出液を精製の出発物質とし、インヒビター活性をMEPの蛍光消光系ペプチド基質、Abz‐ARVRRANS‐Dnaに対する水解活性の阻害で評価しながら、イオン交換樹脂、色素カラム、ゲルろ過などの手法を組み合せて精製を進めた。実験の最中に東工大の広瀬らにより、MEPがsoluble angiotensin‐binding prtoteinと同一であることが報告された。そこで、界面活性剤を用いず、soluble angiotensin‐binding proteinの精製に用いられた疎水性クロマトグラフィーを取り入れてMEPの精製を行ったところ、ウサギ肝臓1kgから200μgのMEPが得られた。また、ホモゲナイズした肝臓の各遠心画分のインヒビター活性を調べたところ、核の画分にMEPの阻害活性が存在することが判明した。しかし、この活性は非常に不安定であった。また、MEPのニワトリ卵抗体により、MEPが脳、肺、肝臓の脈管の表皮の細胞膜に局在していることが判明したため、核に局在すると考えられるインヒビターの役割は現在のところまったく不明である。
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[Publications] Yoshiki Miura: "A limulus intracellular coagulation inhibitor type 2:Purification,characterization,cDNA cloning,and tissue localization." Journal of Biological Chemistry. 270. 558-565 (1995)
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[Publications] Shun‐ichiro Kawabata: "Structure and function of staphylothrombin." Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 20. 345-350 (1994)
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[Publications] Yoshiki Miura: "A limulus intracellular coagulation inhibitor with characteristics of the serpin superfamily,purification,characterization,and cDNA cloning." Journal of Biological Chemistry. 269. 542-547 (1994)
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[Publications] Kishan L,Agarwala: "Activation peptide of human factor IX has oligosaccharides O‐glycosidically linked to threonine residues at 159 and 169." Biochemistry. 33. 5167-5171 (1994)
