1995 Fiscal Year Annual Research Report
Ras/MAPキナーゼシグナル伝達系における転写因子活性の制御機構
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06680684
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
後藤 由季子 京都大学, ウイルス研究所, 助手 (70252525)
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| Keywords | MAPキナーゼ / MAPKK / Ras / 増殖シグナル伝達 / 核移行 |
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| Research Abstract |
哺乳類培養細胞に恒常的活性型MAPKKとしてセリン218とセリン222をグルタミン酸に置換したMAPKKの突然変異体(SESE-MAPKK)とSESE-MAPKKのN末付近20アミノ酸を欠失させた変異体(dNSESE-MAPKK)を発現させたところ、SESE-MAPKKでは30%、dNSESE-MAPKKでは60%の内在性MAPキナーゼが活性化された。転写因子の活性を調べるために、TRE, SRE, CREのそれぞれのエレメントをCAT(クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ)につないだレポータープラスミドとともに培養細胞に形質転換した。dNSESE-MAPKKはTRE-CAT発現活性を1.8倍、SRE-CATを1.7倍、CRE-CATを1.0倍上昇させた。dNSESE-MAPKKと共に野生型MAPキナーゼを共発現させると、TRE-CATは2.6倍、SRE-CATは3.1倍、CRE-CATは0.7倍になった。以上より、MAPキナーゼカスケードの活性化が、TRE及SREの活性化に十分であり、CREの活性化には不十分であることが示唆された。
MAPキナーゼは、増殖刺激等により核移行することが知られている。我々は活性型MAPキナーゼに特異的に反応する抗体を作製し、局在を検討した。活性型MAPキナーゼはまず細胞質で活性化し、活性化よりもかなり遅れて核移行することがわかった。活性型MAPKKを発現すると、MAPキナーゼの核移行が引き起こされた。また、MAPキナーゼの中和抗体によって、MAPキナーゼの核移行が阻害された。従って、MAPキナーゼが何らかの基質をリン酸化することにより、MAPキナーゼの核移行が起こることが示唆された。
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[Publications] Gotoh, Y.: "Involvement of the MAP kinase cascade in Xenopus mesoderm induction." EMBO J.14. 2491-2498 (1995)
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[Publications] Mastuda, S.: "Activation of protein kinase cascades by osmotic shock." J. Biol. Chem.270. 12781-12786 (1995)
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[Publications] Moriguchi, T.: "Evidence for multiple activators for stress-activated protein kinases/c-Jun amino-terminal kinases. Existence of novel activators." J. Biol. Chem.270. 12969-12972 (1995)
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[Publications] Fukuda, M.: "Induction of neurite outgrowth by MAP kinase in PC12 cells." Oncogene. 11. 239-244 (1995)
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[Publications] Moriguchi, T.: "Activation of two isoforms of mitogen-activated protein kinase kinasein response to epidermal growth factor and nerve growth factor." Eur. J. Biochem.234. 32-38 (1995)
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[Publications] Gotoh, Y.: "Initiation of Xenopus oocyte maturation by activation of the mitogen-activated protein kinase cascade." J. Biol. Chem.270. 25898-25904 (1995)
