1994 Fiscal Year Annual Research Report
大腸菌の相同組換えに関与する新しい遺伝子recHの解析
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06740568
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
岩崎 博史 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60232659)
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| Keywords | 遺伝的相同組換え / ruvC遺伝子 / dksA遺伝子 / ホリデ-構造 / 相同組換え中間体 / ホリデ-構造解消酵素 / エンドヌクレアーゼ / 二重変異 |
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| Research Abstract |
大腸菌のruvC遺伝子は,遺伝的相同組換えの中間体であるホリデ-構造を切断するエンドヌクレアーゼをコードしている。ところが,ruvC単独ミュータントは,さほど組換え欠損にならない。このことは,大腸菌にはruvC遺伝子産物以外による組換え中間体のプロセッシング機構が存在することを示唆している。我々は,ruvCとの二重変異で組換え欠損となる新たなTn10挿入変異株を単離し,その原因遺伝子をrecHと名付け解析した。その結果,以下の成果を得た。
recH変異を相補するプラスミドクローンを大腸菌のPstIライブラリーから得た。挿入DNAは,約4kbあり,小原らの大腸菌ラムダライブラリーとハイブリダイゼイションを行いクローンを対応させた結果,λ115とλ166であることがわかった。詳細な欠失プラスミドを作成して対応する遺伝子を求めた結果,dksA遺伝子と recH遺伝子は同一の遺伝子であることがわかった。dksA変異は,分子シャペロニンの一つをコードしているdnaKの欠損を相補するサプレッサー変異(dnaK supressor)として同定された遺伝子であるが,野性型dnaK遺伝子の機能や,サプレッションのメカニズム等詳細はわかっていない。現在,dksA遺伝子と相同組換えとの関係を解析している。
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[Publications] Shinagawa,H.,Iwasaki,H.: "Molecular mechanisms of Holliday junction processing in Escherichia coli." Advances in Biophysics. (印刷中).
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[Publications] Ariyoshi,M.,et al.: "Atomic structure of the RuvC resolvase:a Holliday junction specific endonuclease from E.coli." Cell. 78. 1063-1072 (1994)
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[Publications] Ariyoshi,M.,et al.: "Preliminary crystallographic study of Escherichia coli RuvC protein:an endonuclease specific for Holliday junctions." J.Mol.Biol.241. 281-282 (1994)
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[Publications] Takahagi,M.,et al.: "Structual requirements of substrate DNA for binding to and cleavage by RuvC,a Holliday junction resolvase." J.Biol.Chem.269. 15132-15139 (1994)
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[Publications] Ishino,Y.,et al.: "Amino acid sequence motifs essential to 3'-5' exonuclease activity of Escherichia coli DNA polymerase II" J.Biol.Chem.269. 14655-14660 (1994)
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[Publications] 岩崎博史,品川日出夫: "組換え修復の遺伝学と酵素学" 細胞工学. 13. 720-731 (1994)
