過酸化脂質によるグルタチオンペルオキシダーゼの合成促進作用の解析

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06770171
• Research Institution: Tokai University
• Principal Investigator: 竹腰 進 東海大学, 医学部, 助手 (70216878)
• Keywords: 過酸化脂質 / グルタチオンペルオキシダーゼ / メッセンジャーRNA / 抗酸化酵素

Research Abstract

In vitro系におけるグルタチオンペルオキシダーゼ(GSH-PO)の翻訳合成系を作製し、これを用いて過酸化脂質(t-buthylhydroperoxide)および過酸化水素の翻訳レベルでのGSH-PO合成におよぼす効果を検討した。まず、当施設において既にクローニングされているグルタチオンペルオキシダーゼ(GSH-PO)cDNAを用い、T3 RNA ポリメラーゼによるin vitro転写反応によりGSH-POのsenseおよびantisense RNA(ネガティブコントロール用)を大量に合成した。次に、合成したRNAと[^3H]-leucineをin vitro蛋白翻訳系に加え、GSH-PO蛋白の合成を行った。翻訳反応終了後、抗ラットGSH-PO抗体を用い、免疫沈降法によりラジオアイソトープ(RI)ラベルのGSH-POを回収し、その放射活性を測定した。その結果、GSH-PO sense RNAを用いた翻訳反応では、RIラベルのGSH-PO蛋白が得られ、また、ネガティブコントロールであるantisense RNAを用いた翻訳系では反応産物は観察されず、in vitroにおけるGSH-POの翻訳系を確立することができた。こうして作製したin vitro GSH-PO合成系にt-buthylhydroperoxideおよび過酸化水素を加え、その際のde nobo合成されたGSH-POの放射線量を何も加えていないコントロールと比較した。その結果、t-buthylhydroperoxideを加えた系では、低濃度(0-500nmoles/ml)では、合成されたGSH-POの量に変化は認められず、高濃度(1000nmoles/ml)では、阻害効果が見られた。一方、過酸化水素を加えた系では、濃度10nmoles/mlにおいて薬46%合成促進が認められた。以上の結果より、過酸化水素などの基質によるGSH-POの翻訳レベルにおける合成調節の可能性が示唆された。

Research Products

• [Publications] Matsuno A.: "Application of biotinylated oligonucleotide probes to the detection of pituitsry hormone mRNA using northern blot analysis,in situ hubridization at the light and electron-microscope levels." Histochemical Journal. 26. 771-777 (1994)
• [Publications] Matsuno A.: "Ultrastructural distribution of growth hormone and prolactin mRNAs in normal rat pituitary cells." Histochemistry. 102. 265-270 (1994)
• [Publications] Matsuno A.: "Expression of plurihormonal mRNA insomatotroph adenomas detected using a non-isotopic in situ hybridization." Human Pathology. (in press). (1995)
• [Publications] Matsuno A.: "HGH,PRL and ACTH gene expression in clinically non-functiong adenomas detected with non isotopic in situ hybridization method." Endocrin Pathology. (in press). (1995)