1994 Fiscal Year Annual Research Report
腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒(TDH)変異毒素を用いたTDHレセプターの解析
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06770200
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
飯田 哲也 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (90221746)
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| Keywords | 腸炎ビブリオ / 耐熱性溶血毒 / 変異毒素 |
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| Research Abstract |
本研究では,われわれがこれまでにin vitro mutagenesisの手法で得てきた腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒(TDH)の変異毒素をツールとして用いることにより、毒素蛋白の活性発現機序を解析することを目的として研究を行なった.
これまでに得られていたTDH変異毒素のうち,R7と名づけた変異毒素は血液寒天上で野生型TDHの溶血活性を阻害する活性を示した.そこでこのR7についてより詳細な性状の解析を加えた.精製R7の溶血活性は野生型TDHの1000分の1以下に低下していたが,試験管内で野生型TDHの16倍以上の濃度を共存させた場合R7は野生型TDHの溶血を完全に阻害した.フローサイトメトリーおよびEnzyme immunoassayによりR7のヒト赤血球結合能を解析したところ,R7は野生型TDHにくらべ約50%の赤血球結合能を保持していることが明らかになった.また,野生型TDHにみられる赤血球膜に対するCa^<2+>イオンやpropidium iodide透過性亢進作用はR7では全く観察されなかった.
これらの結果は,R7はその溶血活性はほぼ完全に喪失しているものの,ヒト赤血球への結合能は保持する変異毒素であることを示す.
このような変異毒素の存在は,いまだ詳細なプロセスが明らかでないTDHによる溶血の機構が赤血球膜への結合とそれ以降の過程の,少なくとも2つのステップよりなることを示唆する.また,R7のように細胞(赤血球)への障害作用はもたないが結合能は保持する変異毒素は,いまだ実体の不明であるTDHレセプターの同定のためのプローブとして有用であると考えられ,現在この方向で研究を継続中である.
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[Publications] Tang,G.: "A mutant toxin of Vibrio parahaemolyticus thermostable divect hemolysin (TDH) which has lost hemolytic activity but retains binding ability to erythrocytes." Infection and Immunity. 62. 3299-3304 (1994)
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[Publications] Sang,W.K.: "Hemorrhagic colitis due to Escherichia coli 0157:H7 in Kenya" J.Trop.Pediatr.(in press).
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[Publications] Iida,T.: "Isolation of mutant toxins of Vibrio parahaemolyticus hemolysin by in vitro mutageresis." Toxicon. (in press).
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[Publications] 飯田哲也: "微生物のVirulence-bacteria-細菌" Clin.Infect.Chemotherapy. 1. 9-15 (1995)
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[Publications] 飯田哲也: "細胞情報伝達機構(G蛋白など)を介する毒素-コレラ毒素" 病態生理. (印刷中). (1995)
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[Publications] 飯田哲也: "細菌性下痢症と嚢胞性線維症" 臨床検査. (印刷中). (1995)
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[Publications] 飯田哲也: "臨床DNA診断法(分担)" 金原出版(印刷中),
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[Publications] 飯田哲也: "内科学書(分担)" 南山堂(印刷中),
