1994 Fiscal Year Annual Research Report
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06780502
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
岡本 明弘 大阪大学, 理学部, 助手 (40243159)
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| Keywords | オリゴマー蛋白質 / 耐熱化機構 / 触媒反応機構 / 基質認識機構 / 蛋白質工学 / 量産化 / X線結晶解析 / アミノ基転移酵素 |
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| Research Abstract |
オリゴマー蛋白質として、2量体構造をとる アスパラギン酸アミノ基転移酵素(AspAT)を用い、以下の手順でオリゴマー蛋白質の耐熱化機構に関する解析を行った。
(1)高度好熱菌 Thermus thermophilus HB8のASPAT 遺伝子を、PCR法を用いてクローニングした。
(2)塩基配列決定を行い、アミノ酸配列を推定した。その結果を常温菌の酵素と比較すると、蛋白質の会合面に存在するアミノ酸残基がよく保存されていた。
(3)酵素を量産化するプラスミドを作製した後、酵素を精製した。
(4)円二色性スペクトルによる分光学的測定の結果、約90℃まで耐熱性であった。
(5)酵素活性は、常温菌・好熱菌の酵素いずれもほとんど同じであった。
(6)X線結晶解析で、立体構造を解明するために、酵素の結晶化を行った。
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[Publications] Okamoto,A.: "X-Ray Crystallographic Study of Pyridoxal 5'-Phosphate-Type Aspartate Aminotransferase from Escherichia coli in Open and Closed Forms" J.Biochem.116. 95-107 (1994)
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[Publications] Okamoto,A.: "Construction of Aminotransferase Chimeras and Analysis of Their Substrate" Protein Science. 3. 87- (1994)
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[Publications] Okamoto,A.: "Enzymes with Two Substrate Binding Pockets" Protein Science. 3. 129- (1994)
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[Publications] Okamoto,A.: "Enzymes that Recognize Two Different Kinds of Substrate" Protein Eng.(印刷中). (1994)
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[Publications] 岡本明弘: "新生化学実験講座 第1巻 VII.タンパク質工学 天然タンパク質の安定性の分子設計" 東京化学同人, 33 (1993)
