ショウジョウバエの嗅覚レセプター遺伝子のクローニングとその進化集団遺伝学的研究

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06804045
• Research Institution: Ochanomizu University
• Principal Investigator: 石和 貞男 お茶の水女子大学, 理学部, 教授 (20017205)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山元 大輔 三菱化学生命科学研究所, 主任研究員 ; 松浦 悦子 お茶の水女子大学, 理学部, 講師 (00111691)
• Keywords: キイロショウジョウバエ / 嗅覚レセプター遺伝子 / PCR / 進化集団遺伝学 / クローニング

Research Abstract

5'側、3'側それぞれのプライマーを1本ずつ組み合わせてPCRを行った。これまでに報告されている脊椎動物の嗅覚レセプター遺伝子のコード領域にはイントロンが含まれておらず、これはGタンパク質共役型レセプター遺伝子が一般的にもっている特徴である。そのため、該DNAを鋳型にした場合でも、増幅される断片の大きさは設定したプライマーの位置から予想できると思われる。現在までに、プライマー1、2、3、4、B、Cを用い、アニーリング温度37℃でPCRを行って増幅された断片について、クローニング、シークエンスした。得られた塩基配列をアミノ酸配列に翻訳し、アミノ酸配列データベース(SWISS-PROT)とホモロジー検索を行った。さらに、嗅覚レセプターやGタンパク質共役型レセプター間で保存されているアミノ酸が、よく似た位置にあるかどうか個々のクローンについて調べた。これまでのところ、ショウジョウバエの嗅覚レセプター遺伝子と思われるクローンは得ていない。
また、アニーリングを20℃で行ったPCR産物についてもクローニングし、シークエンスを解析中である。
今後はそれに加えて、ショウジョウバエのGタンパク質共役型レセプター遺伝子の配列を参考にして合成したプライマーを用いたPCRを主として行う予定である。さらに、アンテナ由来のmRNAを抽出しRT-PCRを行うなど、鋳型DNAについても検討するつもりである。